基于薄层生物自显影-原位电离质谱联用的中药降脂活性成分快速筛选及品质评价方法的建立

According to the World Health Organization, obesity is becoming one of the top ten threats to human health. China had surpassed US as the largest population of obese since 2009. Therefore, anti-obese or regulating body weight is a hot topic area of scientific research. It was highly valuable to discover and develop the medications that affect on peripheral inhibition of lipase absorption and HO radicals scavenging from traditional Chinese Medicines (TCMs) and natural sources. Due to the complexity of TCM constituents, it is necessary to establish a new bio-analytical method that is directly associated with pancreatic lipase inhibition and HO radical scavenging. The thin-layer chromatography (TLC)-bioautography method is an internationally recognized approach that combines the TLC separation and in situ determination of bioactivity. In this proposal, a totally new TLC-bioautography-ambient mass spectrometry method is to be developed for simultaneous separation, screening, identification of the potential pancreatic lipase inhibitors and HO radical scavengers from Ilex cornuta and Nelumbo nueifera that were previously confirmed with the activity of regulating body weight. The successful development of proposed the TLC-bioautography-ambient mass spectrometry method in this project would provide a new thought and method for fast separation, screening, identification, and quality evaluation of TCMs, which is directly associated with their bioactivities.

肥胖已成为严重威胁人类健康的十大疾病之一，如何有效减少和控制肥胖已成为当前面临的重要科学研究课题。从中药等天然药物中探寻作用于外周抑制脂肪酶吸收和降低氧化应激水平这两个靶点的减肥降脂药物，具有西药无法比拟的安全性和有效性。因此，亟需建立一种与生物活性直接相关的筛选和评价方法，从中药中快速分离、定位和鉴定减肥降脂活性成分。鉴于此，本课题创新性将薄层生物自显影技术与原位电离质谱联用，充分将薄层生物自显影从复杂体系中直观分离、锁定和评价活性成分的特点与原位电离质谱直接解吸活性斑点结构的特点有机结合，通过建立抑制脂肪酶和清除羟自由基活性的新型薄层色谱生物自显影法，以具有显著减肥降脂作用的中药枸骨叶和荷叶等为研究对象，建立基于薄层生物自显影-原位电离质谱联用方法。该方法的建立及应用将为中药减肥降脂活性成分的快速筛选和鉴定，以及建立与药效相关品质评价体系提供新的思路和新的方法。

肥胖严重威胁人类健康，从中药等天然药物中探寻作用于外周抑制脂肪酶吸收和降低氧化应激水平这两个靶点的减肥降脂药物，具有西药无法比拟的安全性和有效性。因此，本项目建立一种与生物活性直接相关的筛选和评价方法，从中药中快速分离、定位和鉴定减肥降脂活性成分。.首先建立了TLC-生物自显影-脂肪酶抑制剂及羟自由基清除剂筛选方法，对各项试验参数进行优化，并且对该方法进行了系统的方法学考察，并将这两种方法用于的化合物或提取物的筛选及评价。. 接着建立了一种薄层色谱生物自显影技术与静电场诱导喷雾离子源质谱（EFISI-MS）联用的分析方法，；随后探索该TLC-EFISI-MS联用方法在中药多种成分类型中的应用；将其成功运用到复杂基质荷叶、西洋参、枸骨叶、莲子心等中药中具有脂肪酶抑制活性成分的分离、筛选和结构鉴定。.为了验证质谱解析结构的准确，我们对莲子心、枸骨叶具有活性部位进行系统化学成分研究，从莲子心中共分离得到了17个生物碱类化合物，包括6个新的化合物，1个新的天然产物。从枸骨叶中分离、纯化、鉴定得到25个化合物，其中5个新化合物，2个从该种植物中首次分得。. 将分离得到的化合物采用薄层色谱生物自显影方法进行活性筛选，同时采用体外细胞3T3-L1-PPAR γ-Luc 进行活验证，一共有18个化合物具有较好的活性。. 该项目的完成为中药减肥降脂活性成分的快速筛选和鉴定，以及建立与药效相关品质评价体系提供新的思路和新的方法。