三阴性乳腺癌中ppar-gamma去甲基化研究及其临床意义

PPARγ在乳腺癌的发生发展中起重要作用，是乳腺癌预后良好的指标之一。我们前期研究显示，PPARγ在三阴性乳腺癌中表达降低可能与其启动子DNA甲基化有关。推测PPARγ甲基化可能是导致PPARγ激动剂治疗难治性乳腺癌失败的原因之一。如果该设想成立，将会给三阴性乳腺癌患者的治疗带来新的希望。我们拟采用实时荧光定量PCR，Western Blotting，免疫组化等方法首先检测三阴性乳腺癌中PPARγ表达情况，然后用甲基化特异性PCR(MSP)和结合亚硫酸氢钠-限制性酶切法(COBRA)检测三阴性乳腺癌PPARγ基因启动子DNA甲基化状态，再用去甲基化药物及PPARγ激动剂单药或联合用药对三阴性乳腺癌细胞进行干预实验，研究其对三阴性乳腺癌细胞的体外增殖和体内成瘤性的作用，并进一步阐明其分子机制。该课题将为三阴性乳腺癌的药物治疗提供新的靶点和新的思路。

PPARγ在乳腺癌的发生发展中起重要作用，是乳腺癌预后良好的指标之一。我们前期研究显示，PPARγ在三阴性乳腺癌中表达降低可能与其启动子DNA 甲基化有关。推测PPARγ甲基化可能是导致PPARγ激动剂治疗难治性乳腺癌失败的原因之一。如果该设想成立，将会给三阴性乳腺癌患者的治疗带来新的希望。我们采用RT-PCR，Western Blotting，免疫组化等方法首先检测乳腺癌中PPARγ表达情况，结果发现，三阴性乳腺癌中PPARγ mRNA和蛋白表达明显低于其他三种亚型的乳腺癌，表明三阴性乳腺癌中PPARγ 表达受到抑制。然后我们用去甲基化药物肼苯哒嗪对三阴性乳腺癌细胞进行干预，发现去甲基化药物明显诱导三阴性乳腺癌中PPARγ 表达水平，表明三阴性乳腺癌中PPARγ 表达抑制与其启动子DNA甲基化相关。接着用去甲基化药物联合PPARγ激动剂对三阴性乳腺癌细胞进行干预实验，结果发现联合用药进一步提升了三阴性乳腺癌中PPARγ 的表达，说明在解除了三阴性乳腺癌中PPARγ 的表达抑制后，PPARγ激动剂更好的发挥了其配体激活作用。在此基础上，我们进一步研究了去甲基化药物和PPARγ激动剂对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响，发现两药联合明显抑制三阴性乳腺癌细胞的体外增殖和体内成瘤性，并通过si RNA的干预实验证实该抑制作用是通过PPARγ信号通路来实现的。最后，我们又对其分子机制加以研究，发现去甲基化药物和PPARγ激动剂联合用药可明显诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡。该课题将为三阴性乳腺癌的药物治疗提供新的靶点和新的思路。