Klf4基因转录调控网络在脊髓损伤轴突再生中的作用及分子机制研究

神经元内在生长能力对脊髓损伤后的轴突再生意义重大，这种能力受到多种内源性因子调控。转录因子Klf4为该领域最新进展，它能够抑制视网膜神经节细胞损伤后的轴突再生，机制未明。我们的前期研究显示：Klf4参与调控大量基因的表达，其中部分与神经再生相关，如Id2、Wnt等。为证实Klf4是否参与SCI后的神经再生及相关作用机制；本项目拟在前期工作基础上构建Klf4基因转录调控网络，筛选关键节点基因；在大鼠SCI模型上采用原位杂交、免疫组化等手段观察Klf4的表达与分布变化；利用shRNA干扰内源性Klf4的表达与功能，通过功能学评价、组织形态学等手段，探讨其在SCI后轴突再生的作用；并进一步利用免疫共沉淀、Westernblot等技术深入研究其与相关基因所形成的基因转录调控网络在SCI轴突再生过程的作用机制。通过本项目的研究，希望寻找新的调控轴突生长能力的内源性因子，为SCI的治疗提供新靶点。

Klf4不仅能够调控神经元的轴突再生，而且在炎症反应中扮演重要角色，可能参与脊髓损伤后的继发反应。本课题组采用线粒体蛋白刺激体外培养的小鼠小胶质细胞系BV2，检测Klf4的动态表达。采用蛋白印迹技术检测大鼠脊髓损伤模型损伤区不同时间点Klf4的动态表达，初步验证了该基因参与了脊髓损伤的病理进程。尾静脉注射Klf4抑制剂和厚朴酚，观察其是否可以抑制急性期的炎性反应及促进晚期的轴突再生。