754种人miRNAs在乳腺癌患者血清中的表达谱差异及其临床意义

目前，应用于乳腺癌早期诊断的标志物都存在一定的局限和缺陷，制约乳腺癌早期发现，影响乳腺癌患者生存。虽然近年来国内外有关于肿瘤发生与miRNAs表达之间存在关联性等报道，但在众多miRNAs中，哪些与乳腺癌发生、发展和预后密切相关，可能成为乳腺癌标记物尚无系统的研究。本研究拟通过检测已知的754种人miRNAs在乳腺癌患者血液循环中的表达谱差异，结合正常乳腺组织和乳腺癌组织标本，筛选出敏感性强、检出率高的一种或几种miRNAs组合，作为乳腺癌特异性诊断的标志物，解决乳腺癌早期诊断的难题；还将通过在体外实验及临床研究探讨筛选出的miRNAs在乳腺癌发生、发展中的作用，为乳腺癌的治疗提供新的指导依据。本研究检测血清中miRNA含量的方法，取样方便、无创伤、稳定性好，是国内外首次以miRNAs作为乳腺癌诊断标志物的一次尝试，并可能给未来的乳腺癌早期诊断和治疗带来变革。

本研究拟对乳腺癌组织及外周血中miRNAs不同程度表达，揭示了乳腺癌发生与miRNAs 表达之间的关联性。进而寻找预测乳腺癌的复发与转移、判断疗效与预后以及人群普查等方面肿瘤标志物，但本年度仅获得国家自然科学基金的主任基金项目资助，仅对其中的部分内容进行先期研究，并计划根据研究结果进行下一步的研究工作。. 课题组在国内外有关miRNA在乳腺癌中表达情况的最新成果的基础上，对于研究计划书的研究内容作了调整，进行了miRNA125b对乳腺癌化疗耐药方面的研究工作，完成了“乳腺癌患者循环中的miR-125b的表达与化疗治疗抵抗相关性研究” 以及“miR-125b和SP细胞的关系的研究”等方面工作，发现浸润性导管癌患者血液循环中的miRNA的表达，仅有miR-125b与治疗反应有显著的联系，在没有反应的患者中表现出高表达水平；miR-125b高表达的乳腺癌患者的未经化疗的术后标本中表现出高细胞增殖和低细胞凋亡。体外乳腺癌细胞株中也验证miR-125b对抗癌药物抵抗性的增强，降低miR-125b的水平可增加乳腺癌细胞对化疗的敏感性。该实验表明循环中的miR-125b的表达与化疗治疗抵抗乳腺癌有关。这一发现为乳腺乳腺癌化疗中出现化疗抵抗预测有重要的意义。进一步的研究发现化疗抵抗主要是由于抗药干细胞的存在，边缘细胞表现出肿瘤干细胞的特性，包括自我更新、化疗抵抗、干细胞标记物高表达；更重要的是我们观察到边缘细胞、病人对化疗药物的反应与miR-125b的表达有密切的关联性，其中miR-125b的过表达与肿瘤边缘细胞的增加以及癌症干细胞的特性有关；miR-125b的敲除与降低边缘细胞的发生率有关。该结果提示miR-125b在乳腺癌化疗抵抗作用中扮演一个重要角色，可能作为预测癌症治疗反应性的重要标志之一。. 上述研究工作的成果均以论文形式发表。下一步研究我们将进一步研究循环miRNAs作为肿瘤诊断、治疗、疗效预测及预后判断的重要分子标志的可行性以及应用分子生物学技术进行体外细胞水平研究、体内动物实验，可从理论上进一步揭示miRNAs的功能和作用。