嗜人按蚊雌蚊中肠miRNAs表达谱及其对疟原虫感染的调控研究

疟原虫必须在按蚊体内完成复杂的发育、繁殖后才能传播给人类。按蚊中肠是疟原虫入侵建立感染的第一道屏障，因此研究按蚊中肠和疟原虫的相互作用有助于找到有效的防制措施来阻断或降低疟原虫的传播。宿主的microRNAs可通过调控基因表达来调控病原的感染，嗜人按蚊是我国特有的最重要的疟疾传播媒介。因此，本项目采用小RNA克隆、序列分析和Northern杂交等方法研究嗜人按蚊雌成蚊中肠在吸血前、后和伯氏疟原虫感染后的miRNAs差异表达谱，筛选在感染前后表达量有明显差异的中肠miRNAs，采用miRNA Knock down、miRNA过表达结合生物信息学软件预测研究其在嗜人按蚊调控伯氏疟原虫感染中的功能及其调控靶基因，并研究靶基因的表达在嗜人按蚊调控伯氏疟原虫感染中的作用。为将来通过遗传手段控制嗜人按蚊中肠miRNAs表达及其调控的靶基因的表达而达到阻断嗜人按蚊感染疟原虫传播疟疾的最终目标奠定基础。

嗜人按蚊是亚洲地区高效的疟疾传播者，microRNAs参与调控蚊的发育、生理功能及其与病原的相互作用。本项目采用高通量测序、生物信息学分析结合实验验证的方法首次系统地分析了嗜人按蚊miRNAs表达谱，共发现了102种嗜人按蚊miRNAs，其中81种为已知的miRNAs，21种为新的嗜人按蚊miRNAs；比较了嗜人按蚊雌雄成蚊及其不同发育期的miRNAs差异表达，17种miRNAs在雌蚊中表达下调1倍以上，12种miRNAs在雌蚊中表达上调1倍以上。获得了嗜人按蚊吸血前后、伯氏疟原虫感染后中肠的miRNAs差异表达谱。在吸血后中肠中21种 miRNAs表达上调， 8种miRNAs表达下调；在伯氏疟原虫感染中肠中4种miRNAs表达上调，11种miRNAs表达下调。. 本项目发现嗜人按蚊miR-989只在雌成蚊中高表达，miR-2943仅在卵中表达。miR-275在伯氏疟原虫感染中肠的的表达量有1倍以上的下调；miR-92a在吸血、伯氏疟感染后中肠的表达量相对于未吸血中肠的表达量有1倍以上的上调。这些差异表达的miRNAs很可能在调控嗜人按蚊的发育、吸血生理及疟原虫感染中起着重要作用。