乳腺癌及其远处转移特异性循环miRNAs表达谱的建立与验证

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，远处转移常常是乳腺癌患者的主要死亡原因。实验室的早筛查早诊断是保证乳腺癌防治取得实效的关键。miRNAs是一类崭新的细胞内源性非编码小RNA。最新研究提示，在肿瘤发生发展、转移等微观层面，细胞可能主动或被动释放肿瘤内源性的miRNAs进入外周血循环，成为循环miRNAs。因此，本申请拟通过创新性筛选策略，系统性解析乳腺癌及其转移患者及对照血清中潜在miRNAs的种类与丰度，通过微阵列显著性差异分析（SAM）、等深度数据挖掘技术，捕捉乳腺癌及其转移患者血清中特异性上调的miRNAs作为候选分子。基于临床病例-对照队列，通过分层分析、ROC曲线、支持向量机（SVM）等，阐明候选miRNAs与乳腺癌及其转移临床病理特征的关联关系，筛选出3-5个具有乳腺癌及其远处转移敏感性、特异性的miRNAs作为标记物进行盲法验证。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，远处转移常常是乳腺癌患者的主要死亡原因。miRNAs是一类崭新的细胞内源性非编码小RNA。本研究将研究对象分为正常对照组、 乳腺增生组、乳腺癌组（包括乳腺癌淋巴结转移组和乳腺癌淋巴结未转移组） ，采用Agilent miRNA芯片杂交技术对样本miRNAs进行分析，扫描后的tiff格式图片数据采用Feature Extraction提数软件迚行预处理分析，然后采用GeneSpring GX软件计算基因表达差异和统计学显著性p值，旨在筛选乳腺癌及其转移患者血清中特异性表达的miRNAs作为候选分子。经过 Agilent micro RNA 表达谱芯片分析，FC (abs)在2.0倍以上为筛选差异miRNA条件，我们获得如下结果：.1..建立了已经建立了基于常规临床血清标本分离、纯化miRNAs的技术体系，完善了基于常规临床血清标本定量分析循环核酸的技术平台。.2..构建了临床乳腺癌及其转移患者-对照队列，分析了候选miRNAs在疾患个体及对照血清中分布及丰度差异；.3..利用Agilent miRNA芯片杂交技术，以乳腺癌、乳腺癌远处转移（骨、淋巴结等）及同龄健康对照血清池为对照，系统性定量、标化乳腺癌及其远处转移患者血清池中潜在的所有成熟miRNAs；.4..通过所有样品的原始信号值和归一化后的信号结果进行解析，筛选出了在乳腺癌及其远处转移患者血清池中呈显著特异表达的hsa-miR-6090和hsa-miR-415a作为乳腺癌及其转移患者相关的候选miRNAs；.5..对于hsa-miR-6090，与正常对照组比较，其余各组hsa-miR-6090分子表达均下调；其中，乳腺增生组其乳腺hsa-miR-6090分子表达低于乳腺癌组；乳腺癌淋巴结未转移组其sa-miR-6090分子表达低于乳腺癌淋巴结转移组。.6..对于hsa-miR-451a，与正常对照组比较，其余各组hsa-miR-415a分子表达均上调；其中，与乳腺增生组比较，乳腺癌hsa-miR-451a表达上调，并且乳腺癌淋巴结转移组其hsa-miR-451a分子表达高于乳腺癌淋巴结未转移组。.7..根据上述，我们推测hsa-miR-6090，hsa-miR-451a在乳腺肿瘤的发生发展及转移中具有重要作用，正在进行后续的验证和生物学功能的研究。.8..相关文章正在总结发表中