促血管生成相关因子及其受体、MMPs受IL-17RA调控影响非小细胞肺癌进展的作用机制研究

IL-17 secreted by TH17 cell can stimulate various normal cells to product angiogenic factors and MMPs. We found that the expression of IL-17, in NSCLC tumor tissue, was closely related to intratumor vascular density and the expression of MMP9, and it was the independent factor of NSCLC patient's prognosis. IL-17 plays an important role in the tumor development. However, the mechanism of IL-17 receptor IL-17RA in NSCLC cell growth，migration and invasion is still obscure.Therefore，in this study,firstly we will build the stable overexpression and downregulation of IL-17RA in NSCLC cell lines by lentivirus plasmid GV248. Secondly,we will investigate the influence of IL-17RA against the angiogenesis factors secreted by high/low expression of IL-17RA NSCLC cells,evaluate the affection of xenograft growth in C57BL/6 mice.Finaly,we will investigate the influence of IL-17RA against the migration and invasion in high/low expression of IL-17RA NSCLC cells, explore the related MMPs modulated by IL-17RA,illuminate the regulation of related signaling pathway.This subject might provide insights into the role of IL-17RA in tumor development and novel targeted therapy for NSCLC.

TH17细胞分泌的IL-17能够刺激多种正常细胞产生促血管生成因子及基质金属蛋白酶（MMPs）。我们的前期研究发现非小细胞肺癌（NSCLC）癌组织中IL-17表达与肿瘤血管密度、MMP9的表达呈正相关，而且是影响预后的独立因素。故推测IL-17在肿瘤发生、发展中起到重要作用，但IL-17膜受体IL-17RA在NSCLC生长、迁移、侵袭中的调控机制尚未明确。因此本课题拟通过慢病毒质粒GV248构建稳定干扰和过表达IL-17RA的NSCLC细胞株，探讨:IL-17RA对NSCLC细胞分泌促血管生成趋化因子及C57BL/6小鼠体内移植瘤生长的影响；IL-17RA对NSCLC细胞的迁移侵袭能力的影响，进一步明确受IL-17RA调控的MMPs，阐明其调控机制。本研究将有助于我们深入了解IL-17RA在肿瘤发展中的作用，为NSCLC靶向治疗提供新的思路。

肿瘤的发生、发展过程复杂，是细胞生长与增殖的调控发生严重紊乱的结果。细胞的生长和增殖受许多调节因子的调控，肿瘤血管生成是非小细胞肺癌（NSCLC）生长、侵袭和转移的重要原因。IL-17（Interleukin-17）是由Th17细胞分泌的一类具有很强促炎作用的细胞因子，参与许多炎症反应和自身免疫系统疾病。IL-17通过与靶细胞膜表面受体IL-17R结合，可激活下游通路，实现生物学效应。.我们在研究中首先选取了有完整随访资料的NSCLC患者进行免疫组化IL-17RA染色，结合临床病理资料分析其对预后的影响。随后进行了体外细胞株实验：用Western-blot方法检测NSCLC细胞系NCI-H1975, NCI-H157, A549中IL-17RA的表达。同时用慢病毒建立稳定过表达和干扰IL17RA的肺癌细胞株以及对照细胞株。采用MTT法、划痕实验及transwell侵袭实验检测经IL17刺激后过表达/干扰IL17RA对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。抑制p38/NF-kB信号通路后，利用Western-blot方法检测经IL17刺激后过表达/干扰IL17RA对肿瘤细胞MMP2及MMP-9的表达水平的影响。结果发现：IL-17RA 在非小细胞肺癌患者癌组织中高表达，且表达率显著高于癌旁组织。同时IL-17RA 是影响非小细胞肺癌患者预后的重要因素。通过体外细胞实验，我们证实IL-17A/IL-17RA可促进NSCLC细胞侵袭及迁移等多种恶性生物学行为。同时发现IL-17A/IL-17RA可通过激活NSCLC细胞中的p38/NF-kB信号通路上调MMP2和MMP9，从而影响NSCLC的恶性生物学行为，最终促进NSCLC进展。.本项目的实施明确了过表达和沉默IL-17RA后对NSCLC细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响，筛选与IL-17相关的MMPs, 为进一步阐明其相关信号通路的调控机制奠定基础。通过上述研究将有助于我们深入了解IL-17RA在肿瘤生长侵袭转移中的作用，为将来以IL-17RA为靶点的抗肿瘤治疗提供理论依据。