炎症相关miRNA基因多态性与缺血性脑卒中的关系及机制研究

Ischemic stroke has become a great threat to human health and major cause of death in China. Traditional approaches to identification of novel genetic predisposition genes focus on protein-encoding genes, but studies concerning the effect of genetic variation in unencoding genes (pre-miRNA ) regulation is still at its fancy. SNPs in miRNA genes may function as regulatory SNPs through influencing miRNA biogenesis process or target interaction to affect the disease susceptibility. Recent evidence suggests that miRNAs are involved in inflammation related atherosclerosis processes. Therefore, we genotyped inflammation related miRNA polymorphism in a case–control study and estimated their relevance to the risk of IS in the Chinese population. Bi-luciferase reporter assay was used to the identification of miRNA new target genes. The levels of the mature miRNA and inflammatory cytokines were then detected by real time PCR and ELISA test. Our results will give a new explanation for mechanisms of ischemic stroke, at the same time it will bring a new therapy to exploit.

缺血性脑卒中（IS）是危害人类健康的重要疾病，其发病率、致残率及死亡率均高。以往研究主要集中在编码基因的单核苷酸多态（SNP）,而对于基因组序列中98%以上的非编码基因如微核糖核酸（miRNA）基因的SNP研究得较少。miRNA-SNP可导致成熟miRNA水平的改变及miRNA与靶序列结合效应改变，从而影响疾病的易感性; 新近研究显示miRNA在调控动脉粥样硬化炎症反应中发挥着重要作用。因此本研究通过病例-对照研究，探讨炎症相关miRNAs-SNP与IS遗传易感性的关系；进一步对与IS相关的miRNA SNP进行相关的生物学功能研究，荧光素酶报告实验确定miRNAs在IS发病过程中的靶基因，最后通过实时定量PCR测定患者外周血miRNAs水平及ELISA法测定相关炎症因子水平，阐明炎症相关miRNAs多态性影响IS发病的可能机制；为IS的发病机制提高新的解释，同时为其治疗提供新的靶点。

缺血性脑卒中（IS）是危害人类健康和生命的重要疾病，遗传因素在IS的发病中发挥重要作用。miRNA基因上的遗传变异，可能通过影响成熟miRNA表达水平以及与靶基因结合过程中的异常而与疾病易感性有关。新近研究显示miRNA在调控动脉粥样硬化炎症反应中发挥着重要作用。本研究通过病例-对照研究，分析miR-126,miR-122,miR-124,miR-143,miR-146a,miR-196a2,miR-149,miR-499,lncRNA-H19,MALAT1 SNP与缺血性脑卒中发病关系及与卒中不同亚型的关系；进一步通过荧光素酶报告实验确定miRNAs在IS发病过程中新的靶基因。将IS组分为大动脉粥样硬化型（LAA）和小动脉闭塞型（SVO）。在LAA亚组比较中，miR-146a rs2910164 CC基因型及C等位基因频率明显高于对照组。miR-126 rs4636297 在SVO亚组分析发现携带GG基因型比AG+AA基因型发生小动脉闭塞卒中风险增加。H19 rs217727位点TT基因型及T等位基因频率在病例组明显高于对照组分布频率，在SVO亚组分析中,携带TT基因型发生小动脉闭塞型是携带CC + CT基因型1.941倍。 miR-122, rs17669;miR-124, rs531564，miR-143,rs4705342;miR-149,rs2292832;miR-499, rs3746444；lncRNA-H19, rs2251375；MALAT1,rs619686, rs3200401这八个位点基因型及等位基因频率分布在IS组和对照组未见有显著差异,与卒中发病无关。miR-146a显著降低报告基因妊娠相关血浆蛋白- A的活性（PAPP-A）。结论：①miR-146a rs2910164位点CC基因型及C等位基因可增加LAA型缺血性卒中的发病风险，是LAA-IS的独立危险因素。②miR-126 rs4636297位点GG基因型和等位基因G可增加SVO缺血性脑卒中的发病风险,是SVO-IS发病的独立危险因素。③lncRNA-H19 rs217727 位点TT基因型可增加缺血性脑卒中的发病风险，是SVO-IS发病的独立危险因素。④PAPP-A是miRNA-146a新的靶基因，miRNA-146a通过影响靶基因PAPP-A的表达，进一步参与IS 发生。