维生素D受体在低枸橼酸尿症中的作用及中国白、彝族人群维生素D受体基因单核苷酸多态性与低枸橼酸症关联研究

Hypocitraturia is one of the most important factor in causing Urinary stones，it's so poor in researching pathogenesis of hypocitraturia at home and abroad. The concentration of citric acid that is involved in urine is mainly regulated by Na+/dicarboxylate contransporter 1（NADC1） which is expressed by proximal renal tubular epithelial cells, however VDR may played a crucial role in regulation that is NaDC1 take effect in the citric acid with. This study took advantage of a series of molecular biology technology and discussed the function for Vitamin D receptor (VDR ) performed in hypocitraturia ,through investigated the relationship between VDR and NADC1 in the regulation of metabolize in citric acid. In the other hand, it's considered that hypocitraturia has inherited tendency and also has interaction with SNP of VDR. But the systemic study in SNP of allele for VDR is less especially in chinese ethnic groups, thus this study also used the method of single base extension which is performed in 800-1000 blood samples of hypocitraturia patient in Yunnan Bai and Yi population to analyze the relationship between SNP of allele for VDR and hypocitraturia.To provide new ideas on study in susceptible genes for hypocitraturia.

低枸橼酸尿症是泌尿系结石重要的成石因素之一，国内外对低枸橼酸尿症的发病机制研究较少。尿中枸橼酸的浓度主要由近端肾小管上皮细胞的二羧酸转运蛋白1(NaDC1)调控，而维生素D受体（VDR）可能参与了尿枸橼酸的调控，因此我们推测VDR可能在二羧酸转运蛋白NaDC1对尿枸橼酸的调控中起到关键作用。本研究拟利用细胞内转染及基因干扰技术，在细胞水平研究VDR与NADC1在尿枸橼酸代谢调控中的相互关系，探讨VDR在低枸橼酸尿症发病中起到的作用。另一方面，低枸橼酸尿症目前认为具有遗传倾向，并可能与VDR等位基因单核昔酸多态性（SNP）有关联。但还没有对中国少数民族人群低枸橼酸尿症VDR等位基因的SNP的系统研究，因此本研究将还对800-1000例云南白彝族低枸橼酸尿症患者血液样本进行病例-对照系统分析来验证VDR等位基因SNP与低枸橼酸尿症的相关性，为低枸橼酸尿症的易感基因研究提供理论依据。

低枸橼酸尿症作为泌尿系结石重要病因之一，其发病机制尚不清楚，尤其在中国白族、彝族人群中的研究更少。我们通过分子生物学研究探究其发病机制。通过免疫组化检测发现维生素D受体（VDR）和二羧酸转运蛋白1（NaDC1）分别在近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）的核膜和胞膜表达。通过病毒转染在HK-2细胞中沉默VDR表达后，检测发现NaDC1的mRNA及蛋白表达水平与对照组相比均显著下调。尿中枸橼酸的浓度主要由HK-2细胞的 NaDC1调控，而VDR参与了尿枸橼酸的调控。发现VDR在低枸橼酸尿症发病中起到作用。另一方面，低枸橼酸尿症目前认为具有遗传倾向，我们对中国白族360例特发性低枸橼酸尿症患者和216例尿枸橼酸水平正常者的显著VDR基因SNP位点检测发现显著位点rs2228570和中国彝族581例特发性低枸橼酸尿症患者和349例尿枸橼酸水平正常者的显著VDR基因SNP位点检测发现显著位点rs7975232，差异具有统计学意义，为低枸橼酸尿症的易感基因研究提共分子生物学基础。而且我们还分别对220中国白族、彝族低枸橼酸尿症人群进行VDR基因甲基化的检测，并发现有意义片段，为下一步研究提供实验基础。我们在分子生物学基础上证明了VRD在中国白族、彝族低枸橼酸尿症的形成过程中的几种可能机制。中国白族中VDR基因SNP位点rs2228570人群和中国彝族中VDR基因SNP位点rs7975232人群更易发生低枸橼酸尿症。