钙调神经磷酸酶调节因子RCAN1抑制核因子-kappa B活性的分子机制及其在淋巴瘤治疗中的应用

淋巴瘤是源于淋巴网状系统的恶性肿瘤，已成为我国发病率增速最快的恶性肿瘤之一，且发病年轻化趋势明显。研究发现，细胞核转录因子κB（NFκB）在淋巴瘤细胞株和淋巴瘤患者细胞中都存在持续激活的现象。NFκB的持续活化可以加快细胞周期进程、抑制细胞凋亡、促进肿瘤细胞转移等。特异性抑制NFκB的活性已成为抑制淋巴肿瘤生长研究的热点。本课题初步研究结果证实位于21号染色体唐氏综合症侯选区域的钙调神经磷酸酶调节因子RCAN1可以抑制IκB的降解从而降低NFκB的活化，因此推断RCAN1可以作为NFκB及其信号通路的负调控因子，在抑制淋巴瘤的发生和发展中发挥重要作用。本课题将进一步研究RCAN1抑制NFκB活化的分子机制，以及体内体外抑制淋巴瘤细胞生长的作用机制。我们的研究将为淋巴瘤的发病机制提供实验依据，为淋巴瘤的防治提供思路和方法。

本课题研究了钙调神经磷酸酶调节因子RCAN1在NF-kappaB 信号通路中的作用，及其对淋巴瘤的影响及意义。 我们构建了RCAN1 的异构体RCAN1.1mychis,RCAN1.4mychis, 和RCAN1的敲除质粒pSuper-RCAN1以及含NF-kappaB启动子的荧光素酶报告基因表达载体，利用荧光素酶报告系统验证了RCAN1可以抑制NF-kappaB的启动活性。我们用Western-blot 及EMSA技术发现RCAN1 可抑制NF-kappaB 向核内定位，同时发现RCAN1 可提高IkappBa的蛋白水平。我们在研究中发现，RCAN1对NF-kappaB 的抑制作用是通过抑制IkappBa-42 位络氨酸的磷酸化使IkappBa 水平增高。本课题组进行了深入研究， 我们构建了腺病毒表达载体Ad-RCAN1.1,Ad-RCAN1.4, 在研究中发现RCAN1 可以明显抑制淋巴瘤细胞系Raji 细胞活力，并且在感染RCAN1腺病毒表达载体的Raji 细胞中，IkappBa 蛋白水平明显升高，细胞Caspase3/7活性增高，凋亡增加.我们构建了淋巴瘤SCID小鼠动物模型，发现RCAN1可以延长小鼠的成瘤时间，抑制小鼠淋巴瘤的生长。在进一步的研究中，我们发现RCAN1与IkappaBa 存在直接蛋白-蛋白相互作用，而且N-末端序列RCAN1-1-103aa 在抑制NF-kappaB 及抑制淋巴瘤中起着关键的作用。本课题在此方向上进行了深入研究，并撰写论文一篇“The regulator of calcineurin1 (RCAN1) inhibits NF-kappaB and suppresses lymphoma growth in mice”,即将公开发表。本研究不仅为RCAN1 在NF-kappaB信号通路中的作用做了坚实的科研基础，而且为淋巴瘤的治疗提供了一个新的基因治疗方法。