C-肽调控核因子-kappa B及其共激活因子p300防治糖尿病肾病的分子机制

糖尿病肾病（DN）是慢性肾衰竭的最主要原因，病死率高，且无特效疗法。现有研究表明氧化应激是DN发生的中心环节，也被申请者的研究证实。已知氧化应激反应关键酶iNOS最重要的转录调控因子是NF-κB，其激活活性取决于共激活因子p300。两者在DN的发生发展中起着决定作用。C-肽作为生理性小肽，防治DN疗效独特，有着其它外源性药物无可比拟的优势，但分子机制未明，考虑应与调控氧化应激有关。本项目拟在前期实验的基础上，利用在DN中起主要病理作用的系膜细胞进行体内、外实验，首先明确C-肽的细胞功能定位，从NF-κB核转位、NF-κB与DNA结合活性、NF-κB与p300结合活性和p300乙酰化酶活性方面，系统研究C-肽对NF-κB、p300的调控；并应用NF-κB与p300抑制剂，确定C-肽对NF-κB、p300的调控靶点，揭示C-肽防治DN的内在分子机制，为防治DN提供新思路。

氧化应激是DN发生的中心环节，转录调控因子NF-κB及其共激活因子p300调节氧化应激反应关键酶iNOS，在DN的发生发展中起决定作用。C-肽防治DN疗效独特，但分子机制未明。本项目利用在DN中起主要病理作用的系膜细胞进行实验，1.首次发现了C-肽的动态细胞定位：C-肽几乎不进入低糖培养的系膜细胞，但高糖预处理后，C-肽可显著进入系膜细胞的胞浆和核内，并呈时间依赖性，并已报道。2.C-肽可显著抑制高糖刺激的iNOS表达增加，且生理浓度的C-肽抑制效果最显著，并有时间依赖性。3.C-肽虽不能抑制NF-κB的核转位，但可明显抑制其在核仁的定位。4.ChIP和Oligonucleotide Pull-down实验表明，C-肽可显著抑制NF-κB与iNOS基因启动子序列的结合活性。5.Co-IP和Confocal实验表明，C-肽可显著抑制NF-κB与p300结合活性。以上细胞实验明确了C-肽对NF-κB、p300的调控靶点，并在糖尿病大鼠模型体内进行了验证。本研究揭示了C-肽的细胞功能定位，阐明了其防治DN内在分子作用机制。