牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白E2与牛胚胎滋养层细胞相互作用的分子机制研究

近年来，由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的急性、致死性粘膜病及因其感染后产生免疫耐受而导致继发感染造成的犊牛死亡率越来越高。垂直传播是导致该病难以检测和防治的主要原因。BVDV可感染牛胚胎滋养层细胞，穿透胎盘屏障，通过孕畜子宫建立持续感染，导致犊牛从一出生且终身带毒、排毒，对养牛业造成极大的潜在威胁，目前还无有效疫苗进行防治；E2蛋白是BVDV的主要保护性抗原囊膜蛋白，也是与宿主细胞识别、吸附的主要位点，囊膜蛋白与细胞膜蛋白结合而发生吸附是造成BVDV感染细胞的关键第一步。本项目拟构建牛胚胎滋养层细胞cDNA文库，采用酵母双杂交技术筛选与BVDV E2蛋白相互作用的滋养层细胞结合蛋白；利用RNA干扰技术检测细胞结合蛋白在BVDV感染滋养层细胞中的功能，探讨BVDV感染滋养层细胞，引起垂直传播的分子机制，为研发新型BVDV基因工程疫苗、科学防控该病提供理论依据。

通过对新疆地区的BVDV流行病学调查发现，本地区阳性感染率较高，垂直传播严重，基因型分布主要以BVDVIa和Ib型为主。对流行病学阳性样品进一步分离，鉴定了一株BVDV野毒株（shz132株），为非致细胞病变型；成功体外培养了牛胚胎滋养层巨细胞，对细胞进行了鉴定，并成功感染BVDV shz132株；构建了牛胚胎滋养层细胞的cDNA文库；通过酵母双杂交筛选得到6个与BVDV shz132株E2蛋白相互作用的牛胚胎滋养层细胞蛋白，其中网格蛋白是与BVDV感染滋养层细胞相关的蛋白。通过本研究，为揭示BVDV垂直传播，导致持续性感染的分子机制提供线索，也为该病新药物研发、防治及家畜抗病育种工作奠定基础。