αMSH通过PKA和ERK信号通路调节猪脂肪沉积和Leptin及Foxc2分泌的分子机制

目前，αMSH信号通路对动物脂肪沉积的作用机理尚不明确。本研究以地方猪种八眉猪为试验动物，采用RNA干扰、Western Blot、CoIP、Kinase Assay等技术，制备猪MC2R和MC5R基因高效表达稳转株及特异性RNAi载体，分别转染猪脂肪细胞，αMSH处理后检测不同时间点脂肪细胞增殖分化标志基因、脂代谢关键酶及Leptin和Foxc2的mRNA和蛋白表达，测定αMSH通路与PKA和ERK通路关键因子的表达量、相互作用及磷酸化水平，探讨αMSH通过PKA和ERK信号通路调控猪脂肪代谢及Leptin和Foxc2分泌的作用机制；采用体外灌注αMSH和中枢注射SHU9119处理试验猪，在个体水平上验证αMSH通路调控脂肪沉积及其与Leptin和Foxc2分泌的关系。为明确αMSH通路调控猪脂肪沉积提供理论依据，为降低猪脂肪沉积量、提高瘦肉率和研究人类脂肪代谢相关疾病提供一定参考。

以20日龄大白猪作为试验动物，应用脂肪细胞培养、Real-time PCR、Western Blotting、免疫荧光染色和iRNA干扰等研究技术，构建αMSH的外周受体MC2R和MC5R的超表达载体和干扰载体, 与猪脂肪细胞共培养、转染，检测细胞增殖、分化和凋亡标志基因，脂代谢关键酶和PKA通路关键因子的表达量及磷酸化水平。探讨αMSH信号对猪脂肪细胞增殖、分化、凋亡、脂肪酸氧化和白色脂肪棕色化的影响，阐释αMSH调节猪脂肪细胞瘦素（Leptin）和Foxc2分泌的分子机理，初步揭示外周和中枢αMSH信号通路介导猪脂肪沉积和代谢的机制。这些结果将对进一步阐明猪脂肪细胞αMSH信号通路的调控机制，揭示αMSH对Leptin和Foxc2的作用机理，最终控制猪脂肪沉积，提高瘦肉率具有重要的理论价值和实践意义，并对预防和治疗人类肥胖及其相关疾病具有一定的参考价值。