基于PTEN/PI3K/Akt通路探讨血浆miRNA-125b调控多发性骨髓瘤增殖与转移的分子机制研究

Our previous study found that aspirin can induce cell apoptosis of multiple myeloma(MM) through the PI3K/Akt pathway.Recent studies have confirmed that miR-125b is significantly overexpressed in myeloma.Bioinformatics predicts the 3’-UTR of PTEN mRNA contains the base site of miR-125b. Therefore,we speculate that miR-125b can inhibit PTEN gene, and then activate PI3K/Akt signaling pathway by which involved in the biological function of myeloma.We continue to study as follows: 1. Real-time quantitative PCR is used to detect the expression of miRNA-125b in the plasma of patients with myeloma,then investigate the effect of miR-125b down-regulation on the proliferation, migration and metastasis abilities of MM cells. 2. To verify PTEN as the target gene of miR-125b and detect the effect of miR-125b up-regulation/down-regulation on the activation of PI3K/Akt signaling pathway. 3.To investigate the effect of aspirin on the expression of miR-125b in MM cell lines.4. nude mouse models is used to analyze the anti-cancer effect of miRN-125b inhibitor, which provide ideas and drug targets for the new molecular markers of MM, and offer new clues for the invasion and metastasis mechanism of MM.

我们前期发现阿司匹林（ASA）通过PI3K/Akt诱导多发性骨髓瘤（MM）细胞凋亡。新近证实miR-125b在骨髓瘤高表达，生物信息学预测PTEN为miR-125b调控PI3K/Akt信号通路的关键靶基因。提示miR-125b通过PTEN/PI3K/Akt通路参与MM生物学功能。本课题研究：1.qRT-PCR检测miRNA-125b在MM患者血浆的表达，观察其与MM分型、分期、疗效和预后的关系。2.下调miRNA-125b的表达，检测转染肿瘤细胞的增殖、迁移和转移能力。3.明确miR-125b对靶基因PTEN表达的影响及参与PI3K/Akt和MAPK等通路调控的机制，观察ASA对MM中miR-125b表达的影响。4.最终体内裸鼠成瘤实验论证miRNA-125b抑制物的抗癌作用。阐明miR-125b在MM的调控作用，为血浆miR-125b作为MM预后标志物和个体化诊疗提供新的实用靶点。

多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）发病率位居血液肿瘤第2位，虽然近十年来一大批新药如硼替佐咪，沙利度胺等在MM临床一线治疗的应用使患者预后显著改善，但是疾病的复发和耐药仍然是当前临床医师无法克服的问题。因此，从分子水平探讨骨髓瘤发生发展，为从基因水平上防治该病具有重要的现实意义。miR-125b在肿瘤的发生和进展中起着重要的作用，然而miR-125b在骨髓瘤中的作用还不清楚，需要深入地探索。.研究方法：1.高通量测序检测6例骨髓瘤和6例健康对照的血浆标本的miRNA表达，并对差异表达基因进行功能分析。2.qRT-PCR验证并结合MM患者ISS分期、细胞遗传学、FISH检测等临床指标进行相关分析。3.qRT-PCR法来检测骨髓瘤血浆组织和骨髓瘤细胞株中miR-125b和它的靶基因的表达水平、与临床分期、进展的关系。4.通过体外和体内实验检测miR-125b在骨髓瘤中的功能及其靶基因的调控作用(CCK8实验、流式细胞术、迁移和侵袭实验、免疫荧光实验、western blot实验以及裸鼠成瘤实验)。5.荧光素酶实验验证miR-125b的靶基因。6.下调miRNA-125b的表达对靶基因表达的影响及其机制(qRT-PCR、western blot)。7.上调PHLPP2在MM细胞中mRNA和蛋白的表达情况及其调控机制(qRT-PCR、western blot)..研究结果：1. 血浆miR-125b可作为MM分子标志物,将有助于MM的检测、鉴别和预后判断。2.MiR-125b促进MM细胞增殖、迁移和侵袭，抑制其凋亡。3.体内降低miR-125b的表达能够抑制裸鼠移植瘤的生长。4.PHLPP2、MKK7是miR-125b的靶基因，miR-125b在MM细胞中通过靶向抑制PHLPP2、MKK7发挥生物学作用。5. miR-125b通过PHLPP2/Akt通路和MKK7/MAPK参与MM的发生、发展。6.PHLPP2的表达与MM的ISS分期、治疗效果、是否复发有关。7.过表达 PHLPP2 能通过NF-κB 信号通路抑制骨髓瘤细胞增殖与侵袭，使细胞周停滞于 G2/M 期，并促进骨髓瘤细胞的凋亡。8.在体内过表达 PHLPP2 能抑制裸鼠移植瘤的生长。.阐明miR-125b在MM的调控作用，为血浆miR-125b作为MM预后标志物和个体化诊疗提供新的靶点。