咽喉反流病咽喉黏膜微环境变化及其对黏膜修复的影响

Laryngopharyngeal reflux disease (LPRD) is very common among ENT patients, and is the source of a variety of throat and voice problems. The pathogeny of LPRD is not very clear. The clinical features of LPRD are thought to be associated with the damage from the hydrochloric acid and pepsin to the mucosa. Currently, there are few reports about the forms of the mucosal damage in patients of LPRD, and no report was found about the change of regeneration function of the laryngeal mucosa. Mucosa regeneration process needs a series of cytokines. Studies have showed that microenvironment change can affect the proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs), which can affect the regeneration of mucosa. The purpose of this study is to observe the changes of the laryngeal mucosa microenvironment caused by LPRD, and its effect on the regeneration function of the injured mucosa. We will establish an animal model of LPRD. Light microscopy and transmission electron microscope will be used to observe the mucosal injury caused by LPRD, immunohistochemistry will be performed to observe the changes of extracellular matrix and cytokines in laryngeal mucosa, laryngeal mucosa MSCs will be fractional cultivated to observe how the microenvironment changed by LPRD affect the proliferation and differentiation of MSCs, and the most suitable microenvironment characteristics for laryngeal mucosa regeneration will be explored to open up new ideas for the treatment of LPRD.

咽喉反流病是耳鼻喉科的常见疾病，是造成多种喉和嗓音问题的源头。本病病因尚不十分清楚，目前认为其症状、体征的出现与胃酸和胃蛋白酶对咽喉黏膜的直接损伤相关。但以往对于咽喉反流病的黏膜损伤形式报道较少，且尚无本病对黏膜修复功能影响的相关报道。黏膜具自我修复功能，损伤修复过程需要一系列细胞因子的参与，研究显示局部微环境的改变能够影响间充质干细胞的增殖分化，从而影响黏膜的修复功能。本研究目的在于观察咽喉反流病造成的咽喉黏膜微环境的改变，以及其对黏膜修复功能的影响。本研究将建立咽喉反流病动物模型，通过光镜及透射电镜观察咽喉反流造成的局部黏膜损伤，通过免疫组化观察咽喉反流造成的细胞外基质成分及细胞因子的改变，提取动物咽喉黏膜间充质干细胞进行体外培养，观察咽喉反流造成的微环境改变对间充质干细胞增殖分化能力的影响，并探索最适合咽喉黏膜更新修复的局部微环境特点，从而为咽喉反流病的治疗开辟新的思路。

背景： 咽喉反流病是耳鼻喉科的常见疾病，是造成多种喉和嗓音问题的源头。以往对于咽喉反流病的黏膜损伤形式报道较少，且尚无本病对黏膜修复功能影响的相关报道。黏膜修复过程需要一系列细胞因子的参与，局部微环境的改变能够影响间充质干细胞的增殖分化，从而影响黏膜的修复功能。.主要研究内容：建立咽喉反流病动物模型，通过光镜及透射电镜观察咽喉反流造成的局部黏膜损伤，通过免疫组化观察咽喉反流造成的细胞外基质成分及细胞因子的改变，提取动物咽喉黏膜间充质干细胞进行体外培养，观察咽喉反流造成的微环境改变对间充质干细胞增殖分化能力的影响，并探索最适合咽喉黏膜更新修复的局部微环境特点。.重要结果及关键数据：光镜下观察实验组与对照组喉黏膜，见实验组淋巴细胞浸润增多，黏膜下腺体增生。对照组创伤后0h起，黏膜上皮就开始发生明显改变，主要表现在黏膜层部分；创伤后24h起，部分黏膜即出现修复现象，但同时有的部位病变往往比较严重；创伤后3天，大部分黏膜上皮已经修复，固有层纤维组织增生；至损伤后7天大部分黏膜结构恢复正常；创伤后14天黏膜上皮恢复至正常。实验组较对照组炎细胞浸润更多，上皮脱落和组织水肿更严重，损伤修复时程增加，部分黏膜不愈合。免疫组化发现实验组较对照组TGF、IL-1、PCAN、TGF-α表达增加，HSP60、HSP70、TNF-α表达略降低。实验组的增殖和凋亡要高于对照组，细胞活力较对照组减低。 .科学意义：成功通过外源法建立了大鼠咽喉反流动物模型，缩短了造模时间，简化了造模方法。观察了咽喉黏膜损伤修复的形式和时间、咽喉反流病对喉黏膜损伤修复的影响，并观察不同 pH 值作用下咽喉黏膜的损伤程度及修复能力，为后期的成果转化提供了基础和支撑。观察咽喉反流病咽喉黏膜局部细胞因子（即微环境）的变化，及喉黏膜间充质干细胞的增生、分化能力，为咽喉反流病的病因提供了新的视角。