ANXA2（Y23）的磷酸化调节及在介导猪鼻支原体感染和促细胞迁移中的作用和机制

In our previous studies, we discovered that Mycoplasma hyorhinis infects cells through p37-ANXA2 interaction. Mycoplasma hyorhinis infection enhances ANXA2 phosphorylation at Tyrosine 23 (Y23), induces membrane localization of ANXA2, acvtives EGFR and SRC kinases, and promotes cell migration and EMT in the NF-kB- and PI3K-AKT-dependent fashion. Abaltion or chemical inhibition of EGFR or SRC decreases Mycoplasma hyorhinis-induced ANXA2 (Y23) phosphorylation, lowers membrane recruitment of ANXA2, abolishes Mycoplasma hyorhinis infection and the resultant cell migration. These results suggest the existence of a positive feedback mechanism between Mycoplasma hyorhinis infection and activaions of EGFR and SRC. Furthermore, ANXA2 (Y23) phosphorylation may be essential for Mycoplasma hyorhinis infection and induced cell migration. Through site-directed mutagenesis, analysis of expression profile and cellular phenotypes, and establishement of related signaling networks, this project will explore the mechanism underlying SRC- and EFR-regulated ANXA2 (Y23) phosphorylation in the context of Mycoplasma hyorhinis infection. This project will enrich our understanding of the molecular pathways essential for Mycoplasma hyorhinis infection and induced cell migration.

我们在前期工作中发现：猪鼻支原体通过其p37蛋白与膜联蛋白A2（ANXA2）的相互作用感染细胞；支原体感染促进ANXA2（Y23）的磷酸化和细胞膜定位、激活EGFR和SRC、并通过NF-kB及PI3K-AKT通路促进EMT发生和细胞的迁移能力；干扰EGFR或SRC的表达或抑制其激酶活性，均可抑制支原体感染所致的ANXA2磷酸化，并减少其细胞膜定位和支原体对细胞的感染及促迁移作用，提示支原体感染与SRC和EGFR的激活存在正反馈的调节机制，而ANXA2磷酸化在介导支原体感染及促细胞迁移中可能发挥重要作用。本项目将通过点突变、分子与表型的检测和信号网络分析等方法，明确ANXA2 (Y23)磷酸化在介导支原体感染及促细胞迁移中的作用和相关机制、阐明在支原体感染细胞时SRC和EGFR对ANXA2(Y23) 的磷酸化调节机制和彼此的活性调节关系，以期全面认识猪鼻支原体感染及促细胞侵袭转移的分子途径。

病毒与细菌感染在多种肿瘤的发生发展中起重要作用，但有关支原体感染与肿瘤关系的研究较少。我们前期研究的结果提示猪鼻支原体感染同胃癌存在一定的相关性，初步的机理研究结果提示，膜钙调蛋白ANXA2（Y23）的磷酸化及膜定位在介导猪鼻支原体感染和促细胞迁移侵袭中发挥了重要作用；EGFR及Src和S100A10的表达及活性状态均参与调节了ANXA2（Y23）的磷酸化及膜定位过程，但各分子间彼此的调节关系尚不清楚。. 基于上述工作基础，本项目主要围绕：1）ANXA2（Y23）的磷酸化对猪鼻支原体感染及促细胞迁移侵袭的介导作用、2）ANXA2（Y23）的酪氨酸磷酸化调节机制、3）ANXA2（Y23）磷酸化介导支原体感染及促细胞侵袭转移的机制这三方面内容，开展了相关研究，并依据实验进展中的有关结果及围绕相关的临床问题进行了一些拓展性研究，取得了以下主要结果。. 1）明确了猪鼻支原体感染细胞有赖于ANXA2（Y23）的磷酸化； EGFR与Src可通过促进ANXA2（Y23）磷酸化增强胃癌细胞对猪鼻支原体的易感性；而ANXA2（Y23）磷酸化又可正反馈地激活EGFR和Src对ANXA2（Y23）的磷酸化调节。2）发现猪鼻支原体感染可通过激活Wnt2-LRP6-GSK3--Catenin 途径，促进胃癌细胞的迁移；3）研发出可通过竞争性抑制阻断猪鼻支原体感染细胞的多肽药物。4）发现来自人胃癌组织的猪鼻支原体，比猪源性猪鼻支原体对肿瘤细胞具有更强的易感性；伴有猪鼻支原体感染的胃癌II/III期患者，其生存期明显短于无支原体感染患者；同时也发现目前临床用于胃癌预后评价的CD3+T/CD8+T细胞指标在支原体感染的胃癌患者中失去评价意义。. 上述研究结果不但深化了对猪鼻支原体感染以及诱导细胞恶性表型分子机制的理解，也为预防猪鼻支原体感染提供了新的潜在方法，更为猪鼻支原体感染在胃癌预后评价中的作用提供了实验依据。同时也提示了猪鼻支原体感染不但可直接促进细胞迁移侵袭、而且也可能通过负性调节肿瘤微环境的免疫细胞功能而影响患者预后，这为胃癌的精准诊疗提供了新的思路和方向。