lncRNA Rncr4竞争结合miR-125a-5p调控巨噬细胞极化在脉络膜新生血管形成中的作用机制研究

It is known that M2 type macrophages promote CNV formation. However, the mechanisms are not yet clear. It is discovered that lncRNA Rncr4 is decreased in CNV formation, while miR-125a-5p/C/EBPα pathway is key to M2 macrophage polarization. Therefore, in this research, we will focus on lncRNA Rncr4, revealing that lncRNA Rncr4 regulates macrophage polarization by competing for miR-125a-5p, clarifying that C/EBPα mediating IRE1 pathways is the specific molecular mechanism in the macrophage polarization. Subsequently, we will explore inhibiting lncRNA Rncr4 could regulate M2 macrophage polarization and formation of CNV. The study will provide experimental basis for macrophage polarization and explore new strategy for treatment of CNV.

M2型巨噬细胞促进CNV的生长，但其调控机制尚未明了。前期发现，lncRNA Rncr4在CNV形成中表达下调；研究证明，miR-125a-5p靶向C/EBPα通路是调控M2极化的关键机制。因此，本课题组在前期工作的基础上，拟以lncRNA Rncr4为核心展开研究，揭示lncRNA Rncr4竞争结合miR-125a-5p靶向C/EBPα是调控巨噬细胞极化的关键，阐明C/EBPα介导的IRE1通路在巨噬细胞极化中的具体分子机制，探讨通过干预lncRNA Rncr4可以调节M2型巨噬细胞极化，影响CNV的形成。本课题的完成将为揭示巨噬细胞极化机制、探寻治疗CNV新策略提供实验依据。

脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）是导致年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）等疾病视力丧失的主要原因。前期研究发现，M2型巨噬细胞参与了脉络膜新生血管的形成，但其调控机制尚未明了。本课题组首先建立了激光诱导小鼠脉络膜新生血管形成动物模型和IL-4诱导巨噬细胞发生M2型极化模型，采用illumina Hiseq测序平台对小鼠CNV样本进行高通量测序，发现128个lncRNAs有显著变化（P < 0.05，fold change > 2.0）。进一步研究发现，lncRNA NEAT1在小鼠脉络膜组织和M2型巨噬细胞中均表达升高，通过对M2型巨噬细胞转染lncRNA NEAT1 Smart Silencer和小鼠玻璃体腔注入lncRNA NEAT1 Smart Silencer，发现lncRNA NEAT1可以通过竞争结合miRNA-148a-3p靶向调控PTEN蛋白的表达，进一步检测发现抑制lncRNA NEAT1可以逆转M2型巨噬细胞极化和脉络膜新生血管的形成。初步阐明了通过调控lncRNA NEAT1抑制M2型巨噬细胞极化和脉络膜新生血管形成的关键机制。最后，课题组探讨了不同时间点脉络膜新生血管小鼠模型局部组织炎症因子表达情况，发现在小鼠CNV形成的不同时间点，炎症因子均表达升高，玻璃体腔注射aflibercept可以明显抑制炎症因子和M2型巨噬细胞相关mRNA的表达，进一步证明了巨噬细胞和炎症因子在脉络膜新生血管形成中的作用。本课题研究的完成丰富和完善了脉络膜新生血管形成中巨噬细胞极化相关理论，具有一定的创新意义，为更好地通过调控巨噬细胞极化抑制脉络膜新生血管形成提供了新的理论依据和防治新思路。