血府逐瘀汤异于VEGF促血管新生作用机理研究

血管新生在缺血性疾病防治中至关重要。活血化瘀经典方血府逐瘀汤与西药VEGF均有明显促血管生长作用，但VEGF加速动脉粥样硬化形成、诱发或加重肿瘤等严重副作用，未在血府逐瘀汤的长期临床中发现，且中药还有治疗动脉硬化的作用，两者药效差异亟待阐明。本课题组前期研究表明，血府逐瘀汤促血管新生作用与药物浓度和作用时间呈倒U型关系，提示该药可能具有促血管适度生长的作用，药效机制与VEGF存在异同点。据此，本项目提出"血管适度生长调控存在关键基因或调控模式"这个假说，在基因组学观念指导下，以人微血管内皮细胞为模型，利用数字基因表达谱(DGE)等分子生物学技术，通过全面比较中西药影响细胞参与血管新生的功能及基因表达差异，寻找调控血管适度生长的未知重要基因，初步揭示血府逐瘀汤适度调控血管生长的作用机理，为血府逐瘀汤及活血化瘀临床治疗缺血性疾病提供科学依据，为全面研究血管新生的调控机制奠定基础。

本项目首先在非缺氧的正常培养条件（模拟生理条件）下，以人微血管内皮细胞为模型，比较中西两种具有促血管新生功效的药物对内皮细胞增殖、迁移、粘附和成血管等一系列环节的影响，实验结果显示VEGF对上述功能均有显著的、持续的促进作用；同样条件下，特别是口服剂量2倍的血府逐瘀汤含药血清并不影响细胞活性和增殖能力，而对细胞迁移、粘附和成血管的影响均表现出双向调节作用。尤其在成血管这个内皮细胞综合行为效应方面，口服剂量5倍和2倍的药物血清均表现出短暂的促血管生长的现象，有别于VEGF在生理条件下显现出的持久促进作用。上述结果有助于从细胞水平解释VEGF临床使用加速动脉粥样硬化形成、诱发或加重肿瘤等严重副作用产生的原因，并提示血府逐瘀汤临床用药的安全性，同时为本课题组提出的“血府逐瘀汤调控血管适度生长”的新理论以及从血管新生角度为其“活血生新”功能提供实验依据。.在上述实验基础上，本项目选出最佳促血管新生的药物条件，以基因组学观念为指导思想，利用数字基因表达谱(DGE)技术，全面比较中西两种药物所影响的功能基因，为血府逐瘀汤促血管适度生长寻找物质基础。通过对药物及空白对照的转录组数据进行比较分析，可知VEGF下调7个功能基因，共涉及7条有显著差异的通路。GO功能注释分类结果显示差异表达基因在多细胞生物过程，其分子功能涉及结合的基因所占比例最高；而血府逐瘀汤上调1个转录因子，下调4个功能基因，没有显著差异的通路。其差异表达基因在生物调控，分子功能涉及结合和转录因子活性所占比例最高。由于同一个转录因子可调控不同的信号路径，涉及多个生物医学过程，血府逐瘀汤通过控制转录因子的活性表达，实现了以少制多的效果，以满足血府逐瘀汤多途径、多靶点的药效需求，并使调控模式表现出科学、经济和合理的特点。这部分结果进一步从分子水平阐明中西两种药物的药效差异，初步揭示血府逐瘀汤适度调控血管生长的作用机理，为血府逐瘀汤及活血化瘀临床治疗缺血性疾病提供科学依据，为全面研究血管新生的调控机制奠定基础。.综上所述，对照任务书，本课题已完成预期各项目标。