MicroRNA-34b/c基因启动子区多态性及其甲基化与肾癌遗传易感性及其机制研究

Renal cell cancer (RCC) is a common urinary tract tumor. It has been suggested that inactivation of miR-34b/c by CpG methylation is involved in RCC carcinogenesis. Genetic polymorphism in the CpG island can influence the gene methylation status. The pri-miR-34b/c rs4938723T>C polymorphism located in the CpG island of pri-miR-34b/c has been reported to influence the susceptibility of hepatocellular carcinoma. This project will investigate the influence of pri-miR-34b/c rs4938723T>C polymorphism on the susceptibility of RCC and the potentially biological mechanisms. The preliminary studies have found the rs4938723CC genotype was associated with increased RCC risk and lower level of mature miR-34b/c in para-tumor tissues. The project intends to further study the mechanism underlying the regulation of rs4938723T>C on the expression of pri-miR-34b/c and the association between this polymorphism and methylation status of pri-miR-34b/c. The results of the project may contribute to the efforts directed to a better understanding of development of RCC and provide important reference for the early prevention, diagnosis, and treatment of RCC.

肾癌是常见的泌尿系统肿瘤。有研究表明，miR34b/c因甲基化失活参与了肾癌的发生。位于基因启动子区CpG岛的多态性可以通过影响基因的启动子活性或者甲基化状态来调节基因的表达。我们的前期研究发现位于pri-miR-34b/c基因CpG岛的rs4938723T>C位点和肾癌的易感性明显相关；rs4938723CC基因型携带者的肾癌发病风险明显增高，且CC基因型组织中成熟miR34b/c水平较其他型明显降低。本课题在前期研究的基础上，拟采用各种功能学方法进一步研究：pri-miR-34b/c基因启动子区rs4938723T>C多态性对该基因转录活性及转录因子特异性结合亲和性以及对基因甲基化状态的影响。初步阐明miR34b/c参与肾癌发生的可能生物学机制，为今后肾癌的早期预防、诊断和治疗提供重要参考。

研究背景：有研究表明microRNA34家族的表达能受肿瘤抑制基因P53的调控，而其异常表达可调节P53介导的细胞周期暂停和细胞凋亡。本研究旨在探讨位于microRNA34b/c基因启动子区CpG岛中的单核苷酸多态性rs4938723（T>C）对中国人群肾癌易感性的影响及其初步的功能学机制。主要研究内容：临床上我们选取了710例肾细胞癌患者及760例正常体检健康人进行病例对照研究，采用Taqman分型方法对以上研究对象进行rs4938723的分型。从710例肾细胞癌患者中收取27个手术切除患者的癌旁正常组织，利用qRT-PCR技术验证不同基因型肾癌旁正常组织中成熟miR-34b/c的表达水平。采用荧光素酶（Luciferase）报告基因转染实验观察miR-34b/c rs4938723T>C对该基因转录活性的影响。结果及关键数据：从病例对照研究中发现，miR-34b/c rs4938723T>C和肾癌的发病风险明显相关，相对于野生等位基因携带者（TT/TC），纯和突变基因型携带者（CC）的肾癌发病风险明显增高（OR = 1.48，95%CI = 1.05-2.10）。同样的，相对于纯合野生基因型携带者（TT），纯和突变基因型携带者（CC）的肾癌发病风险也明显增高（OR = 1.53，95%CI = 1.06-2.21）。进一步的分层分析研究发现，这种发病风险的差异在老年人群（≥57岁）、男性人群以及有抽烟及饮酒史人群中更为显著。进一步检测含不同基因型TT，TC和CC的癌旁组织发现，纯和突变基因型携带者（CC）组织中pri-miR-34b/c的表达量明显低于野生等位基因携带者（TT/TC）（P<0.01）。荧光素酶报告基因结果发现，含有rs4838723T等位基因的质粒荧光强度显著高于含有C等位基因的质粒。.结论及意义：MiR-34b/c rs4938723C等位基因通过激活miR-34b/c基因启动子活性，可提高肾细胞癌的易感性，有望成为肾癌高位易发人群的重要筛查指标。