肉苁蓉含药血清对化疗耐药骨肉瘤细胞逆转及相关机制的体外试验研究

Osteosarcoma is a highly malignant bone tumor, with a wide range of tissue heterogeneity, the lack of biological markers, a high degree of local invasion, rapid infiltration and metastasis characteristics.Its incidence has been at the top of the primary bone tumor.Clinical treatments include neoadjuvant chemotherapy, surgical resection of the tumor and reconstruction of limb function and systemic therapy with high-dose chemotherapy.Chemotherapy can not only help the surgery, but also can effectively inhibit the metastasis and recurrence of the tumor.It can be said that chemotherapy is the most important in the process of treatment.At present commonly used in clinical chemotherapy with methotrexate, doxorubicin and so on.The sensitivity of chemotherapy plays an important role in the prognosis and survival of osteosarcoma patients.In recent years, multidrug resistance has become a major obstacle to chemotherapy. How to reverse the multidrug resistance of tumor is a hot research topic at home and abroad,the main reason is that the traditional Chinese medicine has the advantages of low toxicity, high efficiency and multi target,it has a greater advantage over chemical drugs.Studies have found that Cistanche can improve immunity, inhibit osteoclasts, promote bone formation, and a synergistic effect of chemotherapy drugs.This research mainly discusses whether the reversal effect of Cistanche medicated serum resistant to chemotherapy of osteosarcoma cells, and study its reversal mechanism.

骨肉瘤是高度恶性的骨肿瘤，具有广泛的组织异质性，缺少生物学标记，高度局部侵袭，快速浸润转移等特性。其发病率已在原发骨肿瘤占据榜首。临床治疗方法主要包括新辅助化疗、手术切除肿瘤并重建肢体功能以及高剂量化疗的系统疗法。化疗不仅能很好的辅助手术治疗，而且对术后肿瘤转移及复发起到有效的抑制作用，可以说，化疗是治疗过程中的重中之重。目前临床上常用的化疗药物有甲氨蝶呤，多柔比星等。化疗的敏感性对骨肉瘤患者的预后及生存期有着重要的临床意义。但近年来，肿瘤的多药耐药已成为化疗的一大阻碍。研究如何逆转肿瘤的多药耐药是目前国内外研究的热点，尤以中药逆转更为突出，主要因为中药具有低毒 、高效 、多靶点的特性，较化学药物具有更大的优势。有研究发现肉苁蓉可以提高机体免疫力，抑制破骨、促进成骨细胞生成，并对化疗药物具有增效减毒的作用。本次研究主要探讨苁蓉含药血清是否对化疗耐药骨肉瘤细胞有逆转作用，并研究其逆转机制。

目前如何逆转肿瘤的多药耐药是国内外研究的热点，尤以中药逆转更为突出，主要是因为中药具有低毒、高效、多靶点协同作用的特性，与化学药物协同使用具有更大的优势。有研究发现肉苁蓉可以提高机体免疫力，抑制破骨、促进成骨细胞生成，并对化疗药物具有增效减毒的作用。本次研究主要探讨苁蓉含药血清对化疗耐药骨肉瘤细胞有逆转作用，并研究其逆转机制。我们通过对MG-63人骨肉瘤细胞的培养，应用梯度浓度的甲氨蝶呤（MTX）诱导使其转化为耐药细胞，用不同剂量的肉苁蓉含药血清干预，观察干预前后细胞形态学上的变化；检测其半数抑制浓度（IC50值）并计算耐药倍数，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，观察肉苁蓉含药血清是否对耐药人骨肉瘤细胞具有增敏及逆转作用。通过流式细胞仪测定不同剂量肉苁蓉含药血清干预后GM-63细胞多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达，检测各组细胞中P53蛋白表达水平的变化，来探索肉苁蓉对耐药细胞逆转的作用机制。通过研究发现，相对正常组细胞，逆转效果最佳的高剂量组，其耐药倍数为1.80，空白组细胞耐药倍数为3.73，结果表明肉苁蓉具有逆转人骨肉瘤MG-63细胞对MTX的耐药作用。通过流式技术检测发现，药物干预后各组细胞凋亡率增加，与肉苁蓉灌胃浓度呈正相关；肉苁蓉含药血清各组MRP1蛋白的表达均降低，高剂量组MRP1蛋白表达最低，表明肉苁蓉可以下调MRP1蛋白的表达；检测发现肉苁蓉含药血清各组P53蛋白表达均下调，高剂量组下调最明显，表明肉苁蓉可下调P53蛋白的表达；因此，我们认为肉苁蓉可以通过促进骨肉瘤细胞的凋亡增强化疗对肿瘤的杀灭作用，同时可通过下调MRP1、P53蛋白的表达逆转人骨肉瘤MG-63细胞的耐药性，增强对MTX化疗的敏感性。肉苁蓉归属补益类中药，具有提高免疫力、增效减毒的作用，本次研究从细胞分子水平进一步探索肉苁蓉逆转骨肉瘤化疗耐药的作用及机制，为中医药“肾主骨，生髓”理论提供细胞学依据，为临床治疗提供了一定的治疗思路和理论依据。