沉默BC047440逆转肝细胞癌多药耐药的体外及体内分子机制研究

多药耐药是肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）的主要治疗困境之一。申请者前期发现的新型HCC相关基因BC047440可能是HCC的细胞周期调节因子，并与HCC的侵袭、转移和生存等生物学行为相关，而BC047440基因过表达HCC细胞系则表现出多药耐药。沉默BC047440基因初步筛选出了4个关键性候选基因（TRAF6、cyclin L、CXCL10及NEIL1）。本研究拟通过靶向siRNA干扰实验分析候选基因介导BC047440基因在调控细胞周期、凋亡抵抗以及多药耐药方面肿瘤生物学行为的分子机制，重点研究BC047440基因经TRAF6/NF-κB信号通路介导凋亡抵抗的直接/间接途径，并通过体外和原位化疗耐药试验探索BC047440基因介导多药耐药的分子机制以及候选基因的信号介导功能，以期将沉默BC047440基因成功应用于逆转HCC多药耐药的临床研究。

本项目严格按照任务书规定完成了研究目标：1、完成了慢病毒介导COMMD7基因沉默逆转HepG2/ADM细胞化疗耐药性机制初步研究。1.1 siRNA干扰BC047440后肝癌细胞凋亡增多，细胞周期停滞于G0/G1期，NF-kB蛋白表达下降。 1.2 Realtime-PCR及Western blot检测提示NF-kb下游的Survivin表达下降，CCNL1表达上升。1.3 证实下调BC047440可通过调控NF-kB及其下游的重要基因Survivin，CCNL1影响肝癌多药耐药（MDR）等生物学行为。 2、完成COMMD7基因调控CXCL10表达对肝癌增殖及凋亡的影响相关实验，完成沉默COMMD7逆转肝癌MDR的分子研究。 2.1 体内外实验证实了COMMD7通过调控肝癌细胞周期和凋亡导致肝癌细胞增殖和MDR现象。 2.2 COMMD7高表达的肝癌细胞中CXCL10显著升高，下调CXCL通路可抑制COMMD7介导的肝癌细胞增殖和转移，提出了CXCL10自分泌环路参与COMMD7介导的肝癌增殖和转移新机制。 2.3 发现COMMD7通过调节自噬和TRAF6导致肝癌细胞MDR，为肝癌化疗耐药机制提供了新的研究数据。由于最近BC047440基因已被重新命名为COMMD7基因，因此在研究报告及已发表的论文中无论采用BC047440或是COMMD7，均指同一基因。总体来说，本研究主体按研究计划进行，达到了预期目标。 . 本项目目前已取得的成果有:1、在国外SCI收录期刊发表研究论著3篇，其中IF>3两篇（6.044、4.092）。2、在国内核心期刊（CSCD期刊）发表研究论著1篇。3、培养硕士、博士研究生各1名。4、结合前期研究成果，成功申报并获得重庆市科技进步二等奖1项。5、以本项目研究为主要基础，成功申报并获国家自然科学基金面上项目资助1项（批准号81372561）。