子宫内膜异位症恶变：基于系谱分析的进化树推断

虽已有诸多证据显示子宫内膜异位症恶变与部分亚型卵巢癌的发生关系密切，但对于子宫内膜异位症恶变进程仍然了解不够。本课题拟对部分卵巢癌患者（包括临床病理诊断内异症恶变和合并内异症）的卵巢癌组织，内异症组织和癌灶周围的正常卵巢组织进行基因甲基化模式多态性的检测；基于分子钟的原理，运用系谱分析和聚类分析方法推断三者的遗传关系，建立子宫内膜异位症恶性转化进化树。力求.1）探索子宫内膜异位症恶变与部分上皮性卵巢癌发生的关系，从表观遗传学角度探索子宫内膜异位症恶性转化。2）了解目前关于子宫内膜异位症恶变的临床病理诊断和基于甲基化进化树的表观遗传学推断之间的关系。.该课题对于从表观遗传学角度探索子宫内膜异位症恶性转化与部分亚型卵巢癌发生的关系，以指导临床更好地诊断子宫内膜异位症恶变，及对子宫内膜异位症进行积极处理，及早期干预卵巢癌具有积极意义。

本课题拟对部分卵巢癌患者（包括临床病理诊断内异症恶变和合并内异症）的卵巢癌组织，内异症组织和癌灶周围的正常卵巢组织进行基因甲基化模式多态性的检测；基于分子钟的原理，运用系谱分析和聚类分析方法推断三者的遗传关系，建立子宫内膜异位症恶性转化进化树。.我们用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing PCR, BSP）分别对卵巢型子宫内膜异位症患者，卵巢子宫内膜样癌或透明细胞癌患者组织标本的目的DNA区域进行甲基化检测，成功测序获得组织标本的目的DNA区域甲基化情况，用聚类分析和基因进化树的方法对甲基化测序结果进行统计分析，初步显示：卵巢型子宫内膜异位症、及卵巢子宫内膜样癌的病灶组织细胞的基因起源接近，但变异较大，很难做出确定的结论。我们也发现由于收集的标本组织量很少，再进行激光显微切割，获得的组织量及提取的DNA更少，无法满足试验所需，并极为费时费力，且结果非常不一致。有鉴于此，我们舍弃了激光显微切割。..在这些情况下，我们对原课题及时进行了调整，对腺肌症/内异症的表观遗传学变异进行了进一步的研究。通过对腺肌症的异位内膜标本进行了免疫组化研究，发现负责DNA甲基化酶的DNMT1，DNMT3A及DNMT3B在腺肌症中的表达异常，从而提示腺肌症中DNA甲基化异常可能较为普遍，故腺肌症和内异症类似，也是一个表观遗传学疾病。而在小鼠腺肌症模型中，我们发现腺肌症可导致中枢神经系统的痛觉抑制功能减弱，表现在中缝大核中的GAD65阳性神经细胞数目减少及中枢敏化。而服用EGCG可改善由于腺肌症导致的中枢神经系统痛觉抑制功能减弱。.此外，我们发现内异症的异位内膜标本中负责组蛋白去甲基化酶1（LSD1）的基因呈异常高表达，且抑制该基因表达可有效抑制细胞增殖，侵袭，而在动物模型中，患有内异症的小鼠在服用LSD1拮抗剂之后可达到病灶显著减小、改善痛觉的效果。