慢性乙肝中医证侯差异蛋白组学及方药干预研究

Chronic hepatitis B is one of the common infectious diseases in China, traditional Chinese medicine syndrome of chronic hepatitis B is the key to the effectiveness of Chinese medicine diagnosis and treatment made the study in the Ministry of Science and Technology Eleventh Five - Year major infectious diseases prevention and control of special - viral hepatitis syndromes biologicallearn the technology platform for research in chronic hepatitis B syndrome proteomics study on the basis of satisfactory results were obtained using isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ-8plex)-based liquid chromatography interfaced with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) proteomic quantitative analysis of Chinese medicine (Yinchenhao tang, lianpuyin Xiaoyaosan) intervention in traditional Chinese medicine syndrome of chronic hepatitis B (liver and gallbladder damp-heat syndrome, spleen and stamach damp-heat syndrome, liver depression and spleen vacuity syndrome) before and after differential proteomics study, designed to reveal the chronichepatitis B with different syndromes proteomic differences, the Chinese medicine diagnosis and treatment to be effective proteomic basis to obtain each permit differential proteome expression，a preliminary proteomic basis for chronic hepatitis B Chinese micro- syndrome differentiation

慢性乙型肝炎是中国常见的传染病之一，慢性乙肝中医证候研究是中医辨证论治取得有效性的关键，本研究在国家科技部十一五传染病重大防治专项-病毒性肝炎中医证候生物学技术平台研究中慢性乙肝证候蛋白质组学初步研究获得满意结果的基础上，采用同位素标记的相对和绝对定量（iTRAQ-8plex）结合液相色谱和质谱串联（LC-MS/ MS）的蛋白质组学定量分析技术对中药（茵陈蒿汤、连朴饮、逍遥散）干预慢性乙肝中医证候（肝胆湿热证，脾胃湿热证，肝郁脾虚证）前后不同时间点的差异蛋白质组学进行研究，旨在揭示慢性乙肝不同证型的蛋白质组学差异性、中医药辨证论治取得效果的蛋白组学依据以及获得各证型差异蛋白组的表达，达到以方测证，方证互验，从而为慢性乙肝中医微观辩证奠定初步的蛋白质组学基础

慢性乙型肝炎是我国当前流行最为广泛的一种传染病,在我国中医治疗慢性肝病已有2000多年历史。慢性乙肝中医证候是否判断准确，是中医药治疗有效性的关键,目前在中医证候蛋白组学研究相关文献较少,采用代表国际最新的蛋白组学定量分析技术，比如itraq等技术的研究慢性乙肝相关证型的文献很少，本实验利用itraq技术研究慢性乙肝证侯差异蛋白组学特点，以揭示各证型间差异蛋白的数量，上调和下调，功能及通路的差异。.方法.1.利用同位素标记的相对和绝对定量（iTRAQ）结合液相色谱和质谱串联（LC-MS/ MS）的蛋白质组学定量分析技术，对慢性乙肝证候差异蛋白组学进行对比研究，然后通过westen-blot进行验证。结果分析采用生物信息学分析技术如Go功能分类与富集分析 、Pathway分析以发现差异蛋白的表达特点、功能分类及定位。.结果.1.蛋白裂解有效，充分，蛋白分布均匀，连续。2.质谱鉴定定量结果存在蛋白质501个，可定量的有491个，唯一肽段3920条，3.肝郁脾虚证和肝胆湿热证比较上调的蛋白有59个，下调的蛋白有64个，肝郁脾虚证和脾胃湿热证比较上调的蛋白32个，下调的蛋白有188个，肝郁脾虚证和健康人组比较上调的蛋白68个，下调的蛋白有95个，脾胃湿热证与肝胆湿热证比较上调的蛋白有189个，下调的蛋白有21个,脾胃湿热证与健康人组比较上调的蛋白有144个，下调的蛋白有39个，健康人组与肝胆湿热证比较上调的蛋白有149个，下调的蛋白有72个；4.从KEGG分析得到的各组间均有差别的通路，各组间有显著性意义的通路是hsa04145（吞噬）hsa00480（谷胱甘肽代谢通路）hsa04514（细胞粘附分子通路）等5.从蛋白的功能分析来看，各组间均有差异蛋白的不同功能特点，6. 本实验采用蛋白印迹法验证三个差异蛋白，结果可以看到与差异蛋白表达相符的趋势，但并未完全吻合。.结论.在慢性乙肝中医证型客观化研究中，采用先进的分子生物学方法比如差异蛋白质组学itraq方法进行研究是可行的，其能够分析出不同证型间的蛋白、蛋白功能及通路的差异特点，有可能成为揭示出中医证候的微观物质基础.