拮抗幽门螺杆菌益生菌菌株的筛选及抑菌活性物质的分离纯化

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是引起慢性胃炎、十二指肠溃疡的主要致病菌，是导致胃癌的潜在发病因子。常规的抗生素疗法存在产耐药性、副作用大等缺点，寻找抗生素替代疗法（如益生菌、生物活性物质、植物提取物等）已成为目前研究的热点。.本研究从本室保存的33株益生菌菌株中筛选出1株枯草芽孢杆菌对Hp具有很强拮抗能力。实验证明该菌株发酵上清液不仅对3株Hp国际标准株具有较强的拮抗作用，还对其他致病菌（如金黄葡萄球菌G+、李斯特菌G+、铜绿假单孢菌G-）具有较强拮抗作用。该活性物质具有热稳定性（95℃，1 h）、宽pH范围适应性（pH 2.0-8.0）以及不被酶解等特性。目前，已用多种纯化方法对该活性物质进行初步分离，随后将对其进一步纯化和分析鉴定；对其抑菌机理、体内抑菌效果评价、代谢通路等方面进行研究，为益生菌制剂和生物活性物质应用于Hp感染的防治作前期的工作铺垫。

本课题前期工作基础中已筛选出一株枯草芽孢杆菌，体外实验证实其发酵上清液对幽门螺杆菌（Hp）具有强抑菌活性。本项目首先对该活性物质进行分离纯化，本实验将NCTC 11637作为指示菌，对多种纯化方法及缓冲条件进行了比较（包括阳、阴离子交换层析、疏水层析、RP-HPLC等），通过培养基优化、发酵工艺优化及分离纯化工艺优化，活性物质纯品的获得量从原来μg级上升到mg级（每升上清液能得到0.56 mg纯品），纯度高于95%，且最大限度保留其活性。随后通过质谱确定该活性物质分子量；通过碳谱、氢谱、核磁等方法对其结构进行初步解析。利用蛋白质组学、生物信息学等方法，对此生物活性物质的功能及作用机理进行研究，为后续研究开发应用提供可靠的理论依据。