转录因子ThPOK在T细胞发育分化中的功能和机制

CD4＋和CD8＋T细胞的发育分化是个复杂而又受着精细调控的过程，一直是免疫学重点研究领域。申请人所在实验室发现的ThPOK(cKrox/Zbtb7b)属于锌指蛋白家族，为至今已知最强调控该过程的转录因子。围绕它的关键问题，即ThPOK是通过何种机制调控下游何种靶基因从而达到影响T细胞发育分化是直接关系到此领域研究进一步展开的重要方向，也是本项目期待解决的问题。申请人希望通过获取全基因组ThPOK蛋白结合信息（ChIP-Seq），结合构建ThPOK缺陷型CD4＋T细胞体系，研究相关基因（CD8，Runx3等）的转录关键区DNA甲基化和组蛋白修饰以揭示其调控机制。同时结合基因芯片信息，利用反转录病毒高转染T细胞系统筛选ThPOK靶基因，从而确定功能基因并构建其T细胞特异性转基因小鼠以分析相关表型。上述结果可望为T细胞分化发育的研究提出新的学术观点，为解决T淋巴细胞功能缺陷性疾病带来可能。

传统T细胞在定向分化的过程中受到重要转录因子ThPok与Runx3的调控，其中ThPok促进双阳性前体细胞向CD4+T方向进行分化，而Runx3则通过活化CD8位点，沉默CD4位点，抑制ThPok表达，从而在CD8+T细胞定向分化过程中发挥促进作用。然而，这两种互相拮抗的转录因子在iNKT细胞中的作用却并没有被广泛认知。已知在小鼠中，CD1d分子限制性的iNKT细胞主要分化为CD4+单阳性和CD4-CD8-双阴性两个亚群，而不同亚群iNKT细胞在活化后能够分泌Th1，Th2以及Th17型细胞因子，且近年来已有文献报道，在ThPok缺失小鼠中出现一群比例和数量都明显增加的CD8+iNKT细胞，故我们在此基础上提出研究问题，ThPok缺失小鼠中出现的CD8+iNKT细胞是否与CD8谱系特异性转录因子Runx3有关，而转录因子Runx3又对iNKT细胞的分化发育和功能具有怎样的影响。研究中，我们利用Runx3敲除，ThPok敲除以及Runx3/ThPok双敲小鼠进行了NKT细胞的表型及功能的分析，结果发现，转录因子Runx3能够部分影响ThPok缺失小鼠中CD8+iNKT细胞的表达，此外，在ThPok缺失的情况下，Runx3能够参与到iNKT细胞在α-Galcer诱导的小鼠急性肝炎模型中的免疫应答。研究结果证明了Runx3对ThPok敲除小鼠中iNKT细胞的表型及功能有重要作用。