双歧杆菌抑制单核增生李斯特菌粘附肠上皮细胞的分子作用机制研究

双歧杆菌在调节肠道微生态平衡、抑制致病菌的侵入、抗肿瘤、抗突变和抗衰老等方面具有重要作用。双歧杆菌在肠上皮细胞上与致病菌进行竞争粘附的分子机制是目前研究的难点，目前仅有少量文献报道双歧杆菌在与致病菌的竞争黏附中具有一定的优势，鲜见两者相互作用分子机制的研究。在双歧杆菌对致病菌粘附入侵相关蛋白的调控表达、以及这种调控表达与致病菌侵袭能力的相关性分析等方面，国内外的研究几乎还是一片空白。本研究拟在Caco-2细胞培养和兔肠结扎两种模型上，改进启动子陷阱技术，筛选在与单核增生李斯特菌相互作用过程中，双歧杆菌发生差异表达的基因，并结合双向电泳进行验证。在此基础上重点研究双歧杆菌引发的肠道致病菌（单核增生李斯特菌）与粘附入侵相关的毒力因子在转录和翻译水平上的表达差异，为从分子水平上阐明双歧杆菌阻抑致病菌粘附的作用机理奠定基础,以及为治疗由致病菌引起的肠道疾病提供理论依据。

益生菌在与致病菌的竞争黏附中具有一定的优势，然而鲜见两者分子作用机制的研究。本研究选择长双歧杆菌和单核增生李斯特菌分别作为益生菌和条件致病菌的代表，以肠上皮细胞为模型，从转录水平和蛋白水平上，验证了长双歧杆菌的粘附蛋白能显著上调表达，而单核增生李斯特菌的粘附入侵和毒力相关蛋白的表达量显著下调。这个结果反映和解释了双歧杆菌在肠道与单核增生李斯特菌竞争过程中占据优势的原因。本研究改进了启动子陷阱技术，成功地从长双歧杆菌和单核增生李斯特菌相互作用后，筛选出23个差异基因。此外，本研究在完成原定计划的基础上，对两歧双歧杆菌和单核增生李斯特菌的相互作用进行了iTRAQ蛋白组学测序，获得53个上调表达蛋白，63个下调表达蛋白。检验证明单核增生李斯特菌和双歧杆菌相互作用后，不仅能够促进生长，还能提高抗氧化胁迫，这也许是条件致病菌存在于健康人胃肠道中的生物学意义之一。另外，我们还分别检测了双歧杆菌粘附蛋白对单核增生李斯特菌和肠道的影响，包括免疫调控等。这些研究将有助于更全面了解益生菌和条件致病菌在肠道环境中的基因调控网络，另一方面将为发现新的功能基因和功能蛋白，建立原创性的科学研究方法和实验模式提供有益的借鉴。