多囊蛋白-2纤毛定位功能肽相互作用蛋白的鉴定及调控研究

肾小管细胞纤毛上多囊蛋白复合体钙内流下降是常染色体显性多囊肾病（ADPKD）发病的重要分子基础，恢复多囊蛋白2（PC-2）依赖的钙内流可逆转ADPKD 病理生理过程，抑制囊肿形成。PC-2 在纤毛的正确定位是其发挥正常功能的先决条件，前期实验中，我们发现决定PC-2纤毛运输及定位的功能区位于N 端的15 个氨基酸肽段，将其称为PC-2纤毛定位功能肽。本研究中我们希望在前期研究基础上应用肽Pull-down、串联亲和纯化及质谱技术筛选与PC-2 纤毛定位功能肽相互作用的蛋白，免疫共沉淀及激光共聚焦技术进行验证，采用RNA干扰（RNAi）技术观察相互作用蛋白对PC-2 纤毛定位和钙内流的调控作用。该研究有助于我们更深入地认识PC-2 纤毛运输、定位及其调控的过程，进一步揭示ADPKD 发病机制，为寻找新的干预靶点奠定实验基础。

肾小管细胞纤毛上多囊蛋白复合体钙内流下降是常染色体显性多囊肾病（ADPKD）发病的重要分子基础，恢复多囊蛋白-2（PC-2）依赖的钙内流可逆转ADPKD 病理生理过程，抑制囊肿形成。PC-2 在纤毛的正确定位是其发挥正常功能的先决条件，前期实验中，我们发现决定PC-2纤毛运输及定位的功能区位于N 端的15 个氨基酸肽段，将其称为PC-2纤毛定位功能肽。本项目中我们在前期研究基础上应用肽Pull-down及质谱技术筛选与PC-2 纤毛定位功能肽相互作用的蛋白Grb2L （SH3-domain GRB2-like 2，Endophilin-I），免疫共沉淀证实Grb2L在肾小管上皮细胞的肾组织中表达并与PC-2相互结合。Grb2L的生物学功能主要是参与蛋白的运输和内吞，可抑制肿瘤细胞生长。进一步研究发现在PC-2突变细胞和pkd2 knock-out多囊肾小鼠组织中Grb2L蛋白表达下调，采用RNA干扰（RNAi）技术knock-down Grb2L后肾小管细胞PC-2表达、纤毛定位及钙内流明显下降，并出现纤毛短缩并出现囊肿表型转化，表明该蛋白可能通过维持纤毛结构及作为PC-2下游信号蛋白介导多囊肾病生成。Grb2L的发现有助于我们更深入地认识PC-2 纤毛运输、定位及其调控的过程，进一步揭示ADPKD 发病机制，为寻找新的干预靶点奠定实验基础。