IL-10+ CD8+调节性T细胞功能及作用机制研究

Treg在免疫调控中起关键作用。CD8 Treg亚群因特异标志为胞内细胞因子，难于分离活细胞而陷入研究瓶颈。我们前期工作发现，IL-4参与下，可能通过基因P16的调节，CD8+ T细胞分化为IL-10+ Treg。这种细胞可抑制CD4+ T细胞增殖，并可能在ConA诱导的小鼠肝损伤耐受中起作用。项目将利用独特的IL-10荧光蛋白报告基因小鼠，以ChIP、Co-IP等技术及P16-/-小鼠，探讨IL-10+ T细胞分化信号通路；以DC/OVAp及相应OT-1或OT-II小鼠源T细胞研究IL-10+CD8+ Treg对靶细胞功能调节的分子机制；以CD8-/-肝损伤耐受小鼠，探讨IL-10+ CD8+Treg在免疫耐受中的作用；以肿瘤细胞EG7及相应的OT-1转基因小鼠探讨IL-10+ CD8+Treg在肿瘤逃逸中的作用。以期深入了解CD8+ Treg在免疫调控中的作用，为临床治疗提供新的线索。

调节性CD8+ T细胞（CD8+Treg）是一大类具有免疫抑制功能的细胞，因诱导分化的条件不同，CD8+Treg各亚群的生物学特性及功能亦有差异。从总体上看，CD8+ Treg的抑制作用可分为IL-10依赖型和非依赖型。但由于缺乏精确可靠的CD8+ Treg分离纯化手段，现有工作的深度特别是体内研究受到了一些限制。本项目借助IL-10荧光蛋白报告基因小鼠，对一群特定细胞培养体系中诱导出的IL-10分泌性CD8+ T细胞的生物学特性及功能进行了探讨，取得如下主要结果：.IL-4在CD4+ Th2细胞亚群以及CD8+ Tc2细胞亚群分化过程中起着重要的诱导作用。我们的工作发现以IL-4作为重要的诱导因子， IL-2作为细胞存活和生长因子，可将naïve CD8+ T细胞分化为IL-10分泌性CD8+ T细胞，而内源性IFN-γ并不影响这一过程。提出了一条诱导CD8+ T细胞分泌IL-10的新途径。.生物学性质研究显示IL-4诱导分化的IL-10分泌性CD8+ T细胞较高水平表达CD44、CD25、CD69以及IL-7R、IL-15R，显示出其具有活化的表型以及较强的生存能力；此外，该细胞还高表达一些Tc2类细胞因子（IL-4，IL-5）、抑制性因子PD-1、以及颗粒酶，穿孔素等。.已有研究显示，IL-10的表达调控机制具有多样性。我们的工作发现细胞周期调节基因Cdkn2a能够特异性调控IL-4诱导分化的IL-10分泌性CD8+ T细胞中IL-10的表达，而对CD4+ T细胞、巨噬细胞以及树突状细胞中IL-10的表达则无影响。首次发现了Cdkn2a参与T细胞分化过程的新功能。.体内、外功能研究显示，IL-4诱导分化的IL-10分泌性CD8+ T细胞在体外能够以IL-10和细胞接触依赖的方式抑制CD4+ T细胞的扩增；而在TNBS诱导的小鼠结肠炎中可通过抑制Th1反应发挥保护机体的作用，表明其在调节性免疫应答中的作用。.总之，我们定义了一群在IL-4诱导下依赖于Cdkn2a产生IL-10的 CD8+ T细胞，这群细胞在体内外都具有一定的免疫调节作用。对该群细胞深入研究将有助于进一步理解CD8+ T细胞的分化、功能和作用机制，完善细胞中IL-10表达的调控网络。