CD8+调节性T细胞在免疫性血小板减少症中的作用和机制研究

Loss of immune tolerance in T cells plays an important role in the pathophysiology of ITP. Our previous study demonstrated that CD4+CD25+ regulatory T cells induced in vitro could further drive DCs into tolerogenic DCs, leading to restoration of immune tolerance of target T cells. CD8+Tregs have been demonstrated to complement the suppression provided by CD4+Tregs. Our recent research revealed that ITP had significantly decreased expression of circulating CD8+CD25+Tregs compared with healthy controls. Based on our above-mentioned study, this research aims to evaluate the effect of CD8+CD25+Tregs on the tolerogenicity of DCs and proliferation, differentiation, apoptosis of CD4+CD25- T cells. Through neutralizing the expression of IL-10, TGF-β, TRAIL or CD94/NKG2A, we evaluate the effect of these interventions on the proliferation, differentiation, apoptosis of CD4+CD25- T cells, exploring the mechanism of CD8+CD25+Tregs-induced immune tolerance in ITP.

T细胞免疫失耐受是免疫性血小板减少症（ITP）重要的发病机制。课题组前期研究发现：ITP 患者体外诱导生成的CD4+CD25+Tregs能够诱导DC致耐受性，进而诱导其他T细胞免疫耐受。作为CD4+Tregs免疫调控体系的重要补充，CD8+Tregs亦参与免疫耐受的调控。课题申请者最新发现：慢性ITP患者外周血CD8+CD25+Tregs细胞数目较对照者外周血中显著减少。本课题拟在前期初步研究基础上，进一步研究CD8+CD25+Tregs对DC致耐受性、CD4+CD25- T细胞增殖、分化及凋亡的影响；研究特异性抗体中和IL-10、TGF-β、TRAIL及CD8+CD25+Tregs表面CD94/NKG2A的表达作用对CD8+CD25+Tregs 诱导CD4+CD25-T细胞分化增殖及凋亡的影响，从细胞和分子水平探讨CD8+CD25+Tregs 诱导免疫耐受的机制。

研究背景 T细胞免疫失耐受是免疫性血小板减少症（ITP）重要的发病机制。作为CD4+ Tregs免疫调控体系的重要补充，CD8+ Tregs亦参与免疫耐受调控。前期我们发现慢性ITP患者循环CD8+CD25+ T细胞数目显著减少，但其功能机制尚待明确。研究内容 本课题探究CD8+CD25+T细胞对DC致耐受性、CD4+CD25-T（Th）细胞分化的影响；利用IL-10、TGF-β、TRAIL抗体阻断培养体系中的细胞因子，检测CD8+CD25+T细胞对Th细胞分化的影响。检测CD8+CD25+T细胞输注和CD8+CD25+T细胞表面CD94/NKG2A封闭对ITP小鼠体内血小板及其抗体、细胞因子、Th细胞分化及B 细胞凋亡的影响。重要结果 1、CD8+CD25+T细胞抑制Th细胞向CD4+CD25-IFN-γ+T（Th1）方向分化，该过程可能通过抑制性细胞因子白介素10的作用实现。2、⑴ CD8+CD25+T细胞输注可提高ITP小鼠的血小板数目，减少血小板凋亡，削弱抗CD61抗体水平的升高幅度。⑵ CD8+CD25+ T细胞输注可促进ITP小鼠脾脏单个核细胞中B细胞的凋亡，抑制Th细胞向Th1方向分化，上调血浆中IL-10、 TGF-β的含量，下调血浆中IL-2、IFN-γ的含量及脾脏单个核细胞中T-bet mRNA的表达量。关键数据 1、CD8+CD25+T—Th细胞共培养后Th向Th1细胞分化的比例明显减少；加入细胞因子IL-10的中和抗体后，Th细胞向Th1细胞分化的比例明显增多。2、⑴ CD8+CD25+T细胞输注组ITP小鼠的血小板数目显著回升,血小板凋亡少于无干预组；抗CD61抗体水平的上升幅度比同期无干预小鼠低，下降速度比同期无干预小鼠快。⑵ CD8+CD25+ T细胞输注组小鼠脾脏CD19+B细胞的凋亡比例明显偏高，Th1细胞亚群比例偏低，T-bet mRNA的表达量下降；血浆中IL-10、 TGF-β浓度明显增多，IL-2、IFN-γ浓度明显减低。科学意义 本研究提示CD8+CD25+T细胞在ITP免疫调节过程中具有免疫抑制作用，其可能通过IL-10作用于Th细胞并抑制其向Th1分化，该发现有助于进一步揭示ITP免疫失耐受发病机制。