长链非编码RNA-NR037844在肝癌转移过程中的功能及机制研究

In recent years, metastasis and recurrence of hepatocellular carcinoma (HCC) has been the biggest obstacle to affect the postoperative survival of HCC. Therefore, investigating the molecular mechanism of recurrent and metastasis has important theoretical guidance and clinical significance. In this research, we carried out a genome-wide lncRNA microarray analysis through different transfer potential of HCC lines. The results revealed differential expression of a subset of lncRNAs, notably a specific differentially expressed lncRNA NR037844. To validate microarray analysis findings, we randomly selected lncRNAs among the differential lncRNAs and analyzed their expression using qRT-PCR in 43 pairs of HCC and corresponding nontumor liver tissues, as well as 97L 97H and LM3 cell lines. The results confirmed that the lncRNA NR037844 was up-regulated in HCC tissues and cell lines with varying degrees. Furthermore, we find that it can promote the proliferation, migration and invasion ability of HCC cell lines. While the regulation mechanism of lncRNA NR037844 during HCC metastasis is still unknown and the biology function also needs to be verified. Based on the above results, we will further study the possible interacting protein of the lncRNA NR037844 and then explore the molecular mechanism of the lncRNA NR037844 in HCC. In addition, we will examine the expression levels of the lncRNA NR037844 in a large sample of liver tissues to determine the correlation between lncRNA NR037844 expression and metastasis, prognosis, recurrence and survival of HCC patients. Taken together, our results will identify the contribution of lncRNA NR037844 in hepatocarcinogenesis, and determine whether deregulation of the lncRNA NR037844 could be used as prognostic biomarkers of HCC.

肝癌的转移和复发是影响肝癌术后生存的最大障碍，因此探讨肝癌转移复发的分子机理，具有重要的理论指导和临床应用意义。本研究通过lncRNA/mRNA表达谱芯片筛选了不同转移潜能的肝癌细胞系中关键的lncRNA NR037844, 研究证实其在43对肝癌组织中表达上调及在不同转移潜能的肝癌细胞系97L、97H、LM3表达逐渐上调，并且可以促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。但NR037844调控肝癌转移的机制尚不明，其对肝癌的生物学作用也有待验证。因此我们将进一步研究NR037844在肝癌转移中发挥功能的分子机制，寻找NR037844可能的作用蛋白，探索其调控机制；本项目还将在大样本肝癌组织中检测NR037844的表达水平，结合临床资料分析其与肝癌转移、预后、生存期等临床指标的相关性，为肝癌诊断提供参考。

肝癌的转移和复发是影响肝癌术后生存的最大障碍，因此探讨肝癌转移复发的分子机理，具有重要的理论指导和临床应用意义。本研究利用lncRNA/mRNA 表达谱芯片技术，筛选不同转移潜能的肝癌细胞系(97L、97H、LM3)中差异表达的lncRNA 1051 个，mRNA 528 个。利用生物信息学、多因素统计分析等手段对差异lncRNA 及mRNA 进行聚类分析、表达差异基因筛选、共表达网络分析及GO、Pathway 分析，并对差异的lncRNA 进行了功能预测，确定了与肝癌转移有关的候选lncRNA LRATS（lncRNA NR037844）, 研究证实其在43对肝癌组织中表达上调及在不同转移潜能的肝癌细胞系97L、97H、LM3表达逐渐上调，并且通过细胞及裸鼠的体内外实验证实：lncRNA LRATS 可以促进肝癌细胞的增殖及迁移能力，在裸鼠体内可促进肝癌的增殖及转移能力。机制方面：申请者通过研究证实了lncRNA LRATS 可在体内外通过与绝缘子CTCF 在空间染色质结构水平相互靠近形成失活的loop 环而抑制了APC 基因表达，致使Wnt/β-Catenin 信号通路激活，从而通过上调此信号通路的下游靶分子C-myc、Cyclin D1 的表达最终促进了肝癌细胞增殖，通过调节E-cadherin、MMP-7 促进了肝癌细胞迁移。并且缺氧促进了染色质组蛋白乙酰化作用上调了lncRNA LRATS 的表达。此外，在大规模肝癌组织中进一步验证了lncRNA LRATS 的表达，结果显示lncRNA LRATS 在140 对肝癌组织中表达上调,并且其高表达与肝癌转移及血管侵袭有关；通过生存分析研究显示，lncRNA LRATS 可作为肝癌患者的一项重要的生物学预后指标。并且本研究明确了lncRNA LRATS 在肝癌转移过程中的作用，探索了其发挥功能的分子机制，为肝癌的发病机制提供新的思路，为阐明lncRNA 的调控机制提供理论依据，完善肝癌调控机制的表观遗传调控网络。