达沙替尼下调CMV活化的NKG2C+NK细胞PD-1表达和增强杀伤ph+白血病干细胞的机制研究

Some patients with CML can withdraw from TKIs after treatment, and the mechanism might be related to the effect of memory NK cells on anti-Ph+ leukemic stem cells (LSCs). Dasatinib affects immune through several pathways including the expression of PD1 in immune cells. Our previous work showed increased NKG2C+ NK cells were found in cases with CMV-DNA+ who suffered Ph+ leukemia and received Dasatinib, and these memory NK cells have anti-LSCs activity. We hypothesize that: CMV infection activates NKG2C+ memory NK cells proliferation; Dasatinib down-regulates the expression of PD1 in PD1+NKG2C+ NK cell subsets and then enhances anti-LSCs activity of these cells. In this study, the effect of Dasatinib on CMV-activated NKG2C+ cell subsets and its mechanism will be studies. Besides, the different NKG2C+ cell subsets on LSCs will be compared. The results will be verified in mouse model with CML LSC. This study might be helpful to clarify the mechanism of TKI withdrawal and to offer foundation for CMV and Ph+ ALL treatment strategies.

CML患者TKIs治疗后部分可成功停药，目前机制不清。有研究表明可能与记忆性NK抗LSC有关。达沙替尼可通过多途径调节免疫功能，包括影响免疫细胞的PD-1的表达。我们前期研究发现达沙替尼治疗Ph+ALL伴随CMV-DNA+的患者出现NKG2C+NK的扩增，这种记忆性NK细胞对Ph+白血病株有杀伤。基于此我们提出假说: CMV启动NKG2C+记忆性NK增殖，达沙替尼下调PD1+NKG2C+NK亚群的PD1表达，增强NKG2C+NK的扩增和对LSC的杀伤。本研究拟体外达沙替尼干预CMV激活的NKG2C+NK不同亚群，探讨达沙替尼对NKG2C+NK不同亚群的影响及机理, 和NKG2C+NK不同亚群对LSC杀伤，并在CML小鼠模型验证。本研究对揭示TKIs治疗后成功停药的机制，对制定CML治疗策略有十分重要的科学意义和实用价值，对Ph+ALL治疗策略也有借鉴意义。

CML患者TKIs治疗后部分可成功停药，目前机制不清。有研究表明可能与NK细胞抗LSC有关。为深入探讨TFR机制,本研究临床研究证实CML患者发病时患者效应性T细胞、细胞毒性T细胞及活化性NK细胞功能受到抑制，达到DMR后恢复；DMR状态下，达沙替尼与伊马替尼相比能进一步促进NK细胞增殖，上调NK细胞活化型受体CD94NKG2C+表达，减低活化性T细胞上pd1表达，促进效应性T细胞活性。单细胞测序比较 TFR患者与健康对照的NK细胞差异结果显示：TFR患者和健康对照组外周血中共定义到5种类型的NK细胞，各种NK细胞亚型的数目无显著性差异,其中一群为血小板结合的NK细胞，根据功能分析推测这类NK细胞可能吸附活化血小板，以此来降低NK细胞的杀伤能力;处于TFR状态的CML患者中的总NK细胞与健康人中的NK细胞在细胞分群和细胞分化上没有显著差别，但CD56 bright NK细胞和transitional NK细胞亚群处于增殖活化的状态，可能与其中JUN，RPS4X，RPLP1及RPS23等基因表达上调促进细胞的增殖相关；mature and terminal NK和CD56 bright NK细胞亚群的细胞毒性整体趋势上高于健康人,可能与HLA-A，ERAP2，GNLY和HLA-C等基因表达上调增强NK细胞的毒性相关;上述NK细胞亚群和基因表达差异可能是维持CML患者的TFR的关键因素。动物实验发现达沙替尼可能增加感染CMV小鼠的记忆性NK细胞(NKG2C+NK,NKG2D+NK细胞)扩增，并增强其抗CML干细胞活性，调控途径可能为pI3K分子信号通路的激活；同时减低CD4+细胞上PD1表达，效应性T细胞Th17活性增强,从而进一步增加其抗白血病作用。本研究结论为临床更多CML患者实现TFR提供新的治疗策略，临床制定CML停药标准提供了理论基础；对目前髓系白血病的免疫治疗，例如CAR-NK治疗中促进NK细胞的扩增、激活及增强NK细胞杀伤肿瘤活性有十分重要的科学意义和实用价值。