疏利少阳，辛通畅络法调控BKB2R表达阻抑糖尿病早期肾小球细胞外基质积聚的机制研究

Diabetic nephropathy is an important cause of end-stage renal disease. The first pathological feature is glomerular sclerosis by excessive accumulation of ECM and early intervention can delay the progression of DN. The regulation of BKB2R in order to reduce excessive accumulation of ECM and improve the KKS system with a combination of the mechanism of glomerular sclerosis-"Shaoyang Shuji BuLi, Shenluo Yuzhi", the therapy about "Shuli Shaoyang, Xintong Changluo" and the obvious curative Chinese medicine-"Shenluoning" show the hypothesis that the medicine which can promote expression of BKB2R and improve the KKS system for early intervention of excessive ECM accumulation is effective way for inhibition of glomerular sclerosis. By transmission electron microscopy, immunohistochemistry, Wester Bloot, RT-PCR and cell culture technique to test BKB2R, glomerular ECM accumulation and growth factor expression related to glomerular sclerosis,traditional Chinese medicine is possible to regulate expression of BKB2R, and increase the inhibition of ECM accumulation through KKS system to prevent glomerulosclerosis

DN是终末肾的重要原因，由肾小球ECM过度积聚所致的肾小球硬化是DN重要病理特征。早期干预肾小球硬化，可延缓DN进展。本项目以调控参与KKS系统阻抑肾小球ECM过度积聚的BKB2R表达为研究切入点，从提高KKS系统干预肾小球ECM过度积聚能力这一视角，结合肾小球硬化的病机关键－少阳枢机不利，肾络郁滞，提出"疏利少阳，辛通畅络"治法，以临床疗效显著的 "肾络宁"为研究载体，围绕 "疏利少阳，辛通畅络法通过促进BKB2R表达，进而提高KKS系统干预DN早期ECM过度积聚能力是阻抑DN肾小球硬化的有效途径" 这一假说，从多层面采用透射电镜、免疫组化、Wester bloot、RT-PCR及细胞培养等技术，动态观察BKB2R及肾小球ECM积聚、促肾小球硬化相关生长因子表达等，探讨中医药通过调控BKB2R表达，提高KKS系统对DN早期肾小球ECM积聚的抑制作用，阻抑DN肾小球硬化的可能性及深层机制。

肾小球硬化是糖尿病肾病(DN)进展的病理表现及最终疾病结局，一直以来，国内外研究普遍认为能否有效地控制肾小球硬化，对延缓糖尿病肾病进展有重要意义。本项目以肾小球细胞外基质积聚作为糖尿病早期肾小球硬化地病变切入点，围绕“调控BKB2R表达可阻抑细胞外基质地过度积聚，从而到达抑制肾小球硬化，延缓疾病进展”的观点，探寻中医药防治糖尿病神笔的有效途径及可能存在的机制。本次研究采用腹腔单次大剂量注射链脲佐菌素和高脂饲养制备DN大鼠模型，通过在体实验证实：疏利少阳，辛通畅络法中药复方可有效改善DN大鼠模型的功能学指标；调控BKB2R的表达，减轻肾脏病理损害；阻抑细胞外基质主要成分及相关促积聚因子的表达，从而抑制了ECM过度积聚，延缓肾小球硬化进展。初步阐明其机制可能与肾络宁调控BKB2R表达，降低ECM中FN与ColⅣ的分泌合成；抑制CTGF与IGF-1等相关促进因子表达，从而减少系膜细胞增殖，阻抑ECM过度集聚，延缓肾小球硬化有关；同时构建疏利少阳、辛通畅络法优化方之HPLC，分析其有效成分；数据挖掘糖尿病肾病经典治疗古方和曹式丽教授诊治糖尿病肾病组方规律分析。此次研究依据前期科研工作及临床实践，证实中药复方“肾络宁”可通过抑制肾小球细胞外基质过度积聚，实现对早期糖尿病肾病肾小球硬化病变进程的延缓，为后续临床治疗与基础研究提供实验研究理论证据。