疏利少阳、辛通畅络法调控免疫调节性 CD4+CD25+T 细胞阻抑膜性肾病肾小球基底膜IV型胶原病变的机制研究

Recently research discovery that cellular immunity path is a significance pathogenesises of membranous nephropathy(MN). Based on before research that treat MN Animal Models by regulate cellular immune function, this study raise the theory that dysfunction of Shaoyang and emphraxis of kidney collaterals is pathogenesis of MN and therapy that regulate Shaoyang and deoppilation kidney collaterals，in order to prove the hypothesis that Shenluoning could treat pathological changes of glomerular basement membrane(GBM) by regulate CD4+ CD25+ Treg cells and suppress neutrophil secrete matrix metalloproteinase-9(MMP-9). So this study adopt cell reject, gene knockout, flow cytometer, electron microscope, immunohistochemisty, RT-PCR to reveal the correlation of CD4+ CD25+ Treg cells with neutrophil, MMP-9 and collagen Ⅳ of GBM, reveal the mechanism of cellular immunity in MN,approach probability that treat pathological changes of GBM by regulate CD4+ CD25+ Treg cells with TCM.

目前研究发现细胞免疫途径亦是膜性肾病的发病机制。本项目是在前期以调节细胞免疫功能干预MN动物模型研究的基础上，以CD4+ CD25+ Treg细胞为研究切入点，从调控CD4+ CD25+ Treg细胞干预GBM病变这一视角，结合MN的病机关键－少阳枢机不利，肾络郁滞，提出"疏利少阳，辛通畅络"治法，以临床疗效显著的"肾络宁"为研究载体，围绕 "疏利少阳，辛通畅络法通过调控CD4+ CD25+Treg细胞，抑制中性粒细胞分泌MMP-9，改善GBM的IV型胶原病变是阻抑MN的有效途径"这一假说，采用细胞剔除、基因敲除、流式细胞仪、透射电镜、免疫组化、RT-PCR等多层面技术，动态观察CD4+ CD25+ Treg细胞与中性粒细胞、MMP-9和IV型胶原表达的相关性，揭示细胞免疫在MN发病机制中的作用，同时探讨中医药通过调控CD4+ CD25+ Treg细胞，改善GBM病变的可能性及深层机制。

目前研究发现细胞免疫途径亦是膜性肾病（MN）的发病机制，同时研究证实免疫调节性CD4+CD25+Treg细胞对中性粒细胞释放基质金属蛋白酶-9（MMP-9）具有调控作用，而MMP-9是导致MN肾小球基底膜IV型胶原病变的病理因素，因此探究CD4+CD25+Treg细胞与MN肾小球基底膜IV型胶原病变的相关性具有重要理论意义，同时探究以“疏利少阳，辛通畅络”立法的中药复方肾络宁调控免疫调节性CD4+CD25+Treg细胞阻抑MN肾小球基底膜IV型胶原病变的作用机制具有临床应用价值。本项目以CD4+CD25+Treg细胞为研究切入点，从调控CD4+CD25+Treg细胞干预肾小球基底膜病变这一视角，结合MN的病机关键－少阳枢机不利，肾络郁滞，提出“疏利少阳，辛通畅络”治法，以临床疗效显著的“肾络宁”为研究载体，围绕“疏利少阳，辛通畅络法通过调控CD4+CD25+Treg细胞，抑制中性粒细胞分泌MMP-9，改善肾小球基底膜IV型胶原病变是阻抑MN的有效途径”这一假说，应用雄性Balb/c小鼠为实验研究对象，通过建立CD4+CD25+Treg细胞剔除组，中性粒细胞剔除组，MMP-9基因敲除组，治疗组，模型组、对照组等，复制MN模型，应用CD4+CD25+Treg细胞，肾络宁等干预治疗，检测血尿生化指标，CD4+CD25+Treg细胞、中性粒细胞相关细胞因子、MMP-9，肾小球基底膜IV型胶原，肾组织病理形态学等相关指标，观察CD4+CD25+Treg细胞与中性粒细胞、MMP-9和肾小球基底膜IV型胶原表达的相关性。实验结果提示免疫调节性CD4+CD25+Treg细胞剔除可导致MMP-9表达增加，加重MN肾小球基底膜IV型胶原病变，同时CD4+CD25+Treg细胞干预具有抑制MMP-9表达，减轻MN肾小球基底膜IV型胶原损害的作用，进而表明MN的发病机制与免疫调节性CD4+CD25+Treg细胞具有相关性，初步证实CD4+CD25+Treg通过抑制中性粒细胞释放MMP-9，减轻肾小球基底膜IV型胶原的损害，进而阻抑MN病理损害的作用机制；同时研究结果提示肾络宁具有调控CD4+CD25+Treg细胞表达，抑制中性粒细胞分泌MMP-9，减轻MN肾小球基底膜IV胶原病变，进而阻抑MN进展的疗效机制，阐释“疏利少阳，辛通畅络”立法的中药复方肾络宁干预MN的优势所在。