从抑制肿瘤干细胞自我更新角度探讨蟾毒灵逆转胰腺癌耐药的作用机制

胰腺癌恶性程度高，目前化疗药物首选吉西他滨，但化疗耐药的存在严重影响了临床疗效。因此，进一步研究逆转胰腺癌化疗耐药的课题已成为关键。近年来，肿瘤干细胞学说成为肿瘤领域的研究热点，该假说认为肿瘤组织中小部分具有自我更新、多向分化和稳态控制能力的亚群决定着肿瘤的形成和进展。文献显示肿瘤干细胞在肿瘤耐药发生中发挥重要作用，而Hedgehog信号通在胰腺癌干细胞自我更新中起了重要作用。蟾毒灵是强心甙类物质，能明显抑制胰腺癌增殖，还可以显著逆转肿瘤细胞多药耐药性。因此，本课题拟在原有工作基础上，采用流式细胞仪分离SW1990/GEM耐药细胞株中的胰腺癌干细胞（其表型为CD44+ CD24+ ESA+ ），采用NOD/ SCID裸鼠抑瘤试验明确蟾毒灵抑制胰腺癌干细胞自我更新的作用，并从调控Hedghog信号通路的角度探讨蟾毒灵逆转胰腺癌耐药的作用机制，为进一步研究抗胰腺癌耐药提供了新的思路和方法。

肿瘤干细胞由于其更强的肿瘤形成能力和耐药性，在肿瘤发生发展过程中起重要作用。因此，发现可以抑制肿瘤干细胞的药物将为抑制肿瘤的生长和转移提供更好的治疗机会。在本研究中，我们在体内以及体外分别验证了蟾毒灵对胰腺癌干细胞的抑制作用。由于耐药肿瘤细胞含有更高的干细胞比例，因此我们选择吉西他滨耐药的人胰腺癌细胞系MiaPaCa2/GEM作为我们的研究工具。我们用无血清悬浮培养的方法，成功富集了人胰腺癌干细胞球。并且我们论证了这些球细胞具有干细胞的特征。用这种胰腺癌干细胞样细胞作为研究模型，我们评价了蟾毒灵对胰腺癌干细胞的抑制作用。我们的研究结果表明蟾毒灵可以抑制胰腺癌干细胞球的数目，并且可以抑制干细胞相关标记蛋白CD24和ESA 的表达。另外，通过裸小鼠皮下接种胰腺癌耐药细胞MiaPaCa2/GEM建立的皮下移植瘤模型中，我们发现蟾毒灵可以明显的抑制肿瘤的生长并且可以延长肿瘤形成的时间。分子生物学实验进一步证明在组织层面上，蟾毒灵同样可以抑制干细胞相关标记蛋白CD24和ESA 的表达。最后在通过尾静脉注射肿瘤细胞建立的肿瘤转移模型中，我们发现蟾毒灵可以抑制肿瘤转移灶的数目。总括起来，我们的研究结果表明，蟾蜍灵一定程度上具有抑制胰腺癌干细胞的特性。