基于重组乙肝病毒免疫治疗病毒持续性感染的研究

T细胞免疫是机体控制乙肝病毒（HBV）感染的重要屏障，能够有效清除HBV在肝细胞的感染和复制；在慢性肝炎过程中，特异性T细胞应答表现为效应和记忆功能损伤，病毒得以逃避免疫机制而形成持续性感染。主动免疫和免疫调节策略具有很好的治疗前景，但基于病毒蛋白的主动免疫仅仅激活一过性T细胞应答，特异性CTL和Th1应答很快回复到持续性感染过程中的免疫耐受状态。在本研究中，我们将设计和构建重组的HBV病毒（rHBV），使其能够在感染野生HBV的肝细胞中实现互补复制，并持续表达外源性抗原分子；rHBV和野生病毒在基因组构成、病毒复制以及表达机制上具有最大的一致性，因此，我们希望由rHBV表达的外源抗原分子能够激活体内较强的T细胞应答，由外源抗原特异的功能性T效应细胞控制HBV慢性感染。我们将应用基于转基因小鼠的多种体内实验模型，设计和制定rHBV主动免疫策略，并对这一全新的免疫治疗概念进行系统性分析。

T 细胞免疫是机体控制乙肝病毒（HBV）感染的重要屏障。在慢性肝炎过程中，特异性T 细胞应答表现为效应和记忆功能损伤，病毒得以逃避免疫机制形成持续性感染。主动免疫和免疫调节策略具有很好的治疗前景，但基于病毒蛋白的主动免疫仅仅激活一过性细胞免疫应答，特异性CTL 和Th1 应答很快回复到持续性感染过程中的免疫耐受状态。在本项研究中，我们基于早先的工作（Hepatology, 2009），对基于外源性抗原重组乙肝病毒（rHBV）的免疫治疗策略进行深入研究和探讨。rHBV实际是一种携带外源性抗原表位序列的复制缺陷病毒，只有在野生病毒（wtHBV）共感染的肝细胞中，由反式互补实现复制并不断表达外源抗原分子、激活功能性T 细胞应答。由于rHBV 和wtHBV具有相同的复制周期，包括在转录和转录后、翻译加工、病毒包装成熟等多种水平，我们期望rHBV激活的外源性T 细胞应答能够有效控制rHBV 自身的复制，而这一机制将最终清除wtHBV 的持续性感染。在我们早先的策略中，rHBV 病毒首先被用作一种基因治疗和免疫治疗载体，但这一概念性策略缺乏实际可操作性。在进一步研究中，我们构建和应用重组腺病毒载体(rAd)以实现rHBV的高效传递(delivery)。rAd/rHBV 感染HepG2.2.15细胞系能够实现rHBV的优势复制，但这一复制具有显著的wtHBV依赖性。免疫学方面，外源性抗原免疫的HLA-A2转基因小鼠由静脉注射rAd/rHBV，能够激活肝组织中外源性抗原特异的功能性T细胞应答。应用原代培养的树鼩肝细胞，我们进而证实了rHBV病毒粒子的可感染性，因此，rAd/rHBV感染肝细胞后能够实现rHBV在肝组织内的再感染和传播，可能放大抗病毒免疫治疗效应。最后，我们应用近期发展的腺相关病毒(rAAV8)重组HBV的小鼠(HLA-A2)持续感染模型，对rAd/rHBV的主动免疫策略进行系统性分析，显示这一外源抗原策略能够有效突破rAAV8-HBV的肝脏免疫耐受，并清除病毒慢性感染，因此具有很好的临床实际应用前景。本项工作完成良好，相关研究论文目前正在审稿中（Hepatology, 2013）。