发展腺病毒载体的外源抗原重组乙肝病毒治疗慢性病毒性肝炎

Hepatitis B virus (HBV) remains a major cause of human disease worldwide. We previously proposed a new concept of therapeutic vaccination against chronic HBV infection, based on a recombinant HBV (rHBV) carrying a sequence encoding foreign antigenic epitopes. In the current study, practically, we plan to make the advantage of adenovirus vector(s) to deliver rHBV (rAd/rHBV), aiming to cure HBV infection by double regulations at the gene therapy and active immunization levels. rHBV would be efficiently delivered by the adenovirus vector and only self-maintain in hepatocytes already infected by HBV through capsid complementation. Virologically, rAd/rHBV is supposed to have an advantage in the viral replication which could effectively suppress wild type HBV (wtHBV) infection. Released progeny rHBV may infect more hepatocytes that expands the therapeutic effect. Moreover, for vaccination purpose, capsid-rescued rHBV replication leads to a productive expression of the foreign antigenic epitopes which in turn activate vigorous T cell responses in situ. Since rHBV co-maintains with wtHBV and shares the same replicative cycle, rHBV-based T cell responses might exert antiviral functions and finally eliminate the wtHBV infection. In the study, a comprehensive analysis will be preformed in vivo and in vitro to characterize rAd/rHBV virologically and immunologically. A surrogate model of HBV transgenic mouse with MHC-I humanized background would be established for a systematical evaluation of the rAd/rHBV-based therapeutic strategy.

乙肝病毒慢性感染仍然是世界性公共健康问题。我们在早先研究中设计构建了一种外源性抗原重组的乙肝病毒(rHBV)，提出基于外源抗原T细胞应答的免疫治疗概念。本项课题中，我们拟应用腺病毒载体的rHBV病毒（rAd/rHBV），发展基于基因治疗和主动免疫的双重策略。rAd/rHBV感染野生乙肝病毒已感染的肝细胞、互补复制产生子代rHBV，在病毒学机制上，rAd/rHBV能够有效竞争并抑制野生乙肝病毒复制，释放的病毒粒子进一步感染其它肝细胞，放大非增殖性腺病毒载体的治疗效应；疫苗策略上，互补复制的rHBV高效表达外源抗原，由于rHBV和野生乙肝病毒具有相同的复制机制，外源抗原激活的功能T细胞应答将最终清除野生病毒的感染。我们将通过体内和体外实验对rAd/rHBV的病毒和免疫学特征进行分析，同时，我们拟建立HLA-A2人源化背景的可复制乙肝转基因小鼠模型，对rAd/rHBV治疗策略进行系统评价。

中国作为世界乙肝高发区之一，研究乙肝慢性感染、开发有效的抗病毒治疗具有重大的社会意义。在乙肝慢性感染过程中，针对病毒特异的效应细胞通常处于耐受或耗竭状态，主动免疫能够暂时性激活效应T细胞，但特异性免疫和免疫记忆反应很快回复到病毒持续性感染形成的免疫耐受状态。因此，我们提出一种基于外源性抗原T细胞应答的免疫治疗概念，设计构建了一种重组乙肝病毒(rHBV)。rHBV基于野生乙肝基因组构建，并引入外源性抗原表位；由于rHBV和野生病毒具有相同的复制机制，rHBV激活的外源性T细胞应答将最终控制野生病毒的持续性感染。 . 我们利用重组腺病毒载体携带rHBV(rAd/rHBV), 证实能够有效转导并稳定产生野生乙肝病毒的肝细胞系，被携带的rHBV相对于野生病毒具有显著的复制优势；同时，应用原代培养树鼩肝细胞证实rHBV子代病毒具有感染性。这一结果极大地增加了rHBV重组腺病毒载体的抗病毒效应。此外，我们建立了基于腺相关病毒载体（rAAV-HBV）的乙肝慢性感染人源化转基因（HLA-A2 Tg）小鼠模型。外源性抗原DNA免疫后应用rAd/rHBV感染能够诱导HLA-A2小鼠肝脏中功能性的T细胞应答。基于上述主动免疫策略则能有效清除rAAV-HBV小鼠模型中乙肝慢性感染，实现乙肝病毒抗原的血清转换。此项研究体现了打破免疫耐受、清除慢性乙肝感染的有效治疗策略。. 本项研究近期在国际主流病毒学杂志在线发表 (通讯作者邓强)：Adenoviral Delivery of Recombinant Hepatitis B Virus Expressing Foreign Antigenic Epitopes for Immunotherapy of Persistent Viral Infection. J Virol. 2013 Dec 26. [Epub ahead of print]. 同时，本项研究在2013年获得了国际专利技术授权：Polynucleotides allowing the expression and secretion of recombinant pseudo-virus containing foreign epitopes, their production, and use. US 8343757 B2 (第一发明人邓强)。