负载CRCL的DEX在胶质瘤免疫治疗中的作用及机制研究

Exosome derived from DC (DEX) almost load all antigen presenting molecules. DEX activate the NK cells and T cells and stimulate and magnify the inherent immunity and adaptive immune response. CELLing1000 system will be used to produce DEX in this projection. We will compare the DEX produced by CELL1000 system and traditional method in production, phenotype, morphology and immune function. Glioma cell lysate content (L261) and chaperone-rich cell lysates (CRCL-L261) as antigens load DC to prepare DEX (L261) and DEX (CRCL-L261). The immune molecules of DEX will be investigated by solid-phase immuno-electron microscopy and western blotting. In vivo and in vitro experiments demonstrate the DEX loaded with CRCL will play efficient antitumor function. We will reveal that DEX loaded with CRCL regulate CD4+，CD8+ and NK cells through Cbl-PI3K-MAPK signal transduction pathways. This project will improve DEX preparation methods, for the first time demonstrate the role of DEX in glioma immune therapy and reveal the immune adjustment mechanism. DEX loaded with CRCL will provide efficient and feasible method for glioma immune therapy.

树突状细胞(DC)分泌的exosome（DEX）几乎负载了DC 的所有抗原提呈分子，DEX 通过NK细胞和T细胞激发，放大固有免疫和适应性免疫应答。本项目应用CELLing1000体系制备DEX，与传统方法制备的DEX在产量，表型，形态学，免疫功能方面进行比较。分别用胶质瘤细胞裂解物（L261）及分子伴侣细胞裂解物（CRCL-L261）作为抗原负载DC，制备得到DEX（L261）和DEX(CRCL-L261)，采用免疫电镜法及Western blot观察DEX的免疫分子的表达，通过体内外实验阐明负载胶质瘤CRCL的DEX能够发挥高效的抗胶质瘤作用。观察负载CRCL的DEX通过Cbl-PI3K-MAPK信号转导通路对CD4+，CD8+T细胞及NK细胞的调节作用。本项目的完成将改良DEX的制备方法，首次阐明DEX在胶质瘤免疫治疗中的作用，揭示其免疫调节机制，为胶质瘤免疫治疗提供高效可行的方法。

负载exosome的DCs可以有效刺激T淋巴细胞产生抗肿瘤免疫效应。但是，获取DC来源的exosome数量有限，这是限制该领域进步所需要解决的实际问题。胶质瘤进展快，发病率及死亡率高，是难以治愈的预后差的恶性脑部肿瘤。我们的研究表明CELLine 1000培养体系可以显著提高DCex的产量。与传统方法比较，这些DCex在形态学，表型，免疫分子的表达是相同的。我们的研究提供了一种明显提高exosome产量的方法。我们的研究结果表明CRCL-GL261可以更好的刺激DCex或DC细胞免疫分子的表达。CRCLs 在抗肿瘤疫苗中有着重要的作用。有报道发现肿瘤来源的CRCLs可以刺激DCs成为具有抗肿瘤潜能的DCs，但是，DC来源的exosomes(DEXs)负载CRCLs在治疗肿瘤方面的作用还不清楚。在我们的研究中DEXs负载GL261胶质瘤细胞来源的CRCLs，这些DEXs被称为（CRCL-GL261）-DCs较负载GL261细胞裂解物的DEX，也就是DEX (GL261)-DCs更能够促进CTL的细胞增殖，促进CD4+及CD8+细胞的活性。DEX (CRCL-GL261)-DCs能够明显延长肿瘤小鼠的生存，抑制体内肿瘤生长。而且，DEX (CRCL-GL261)-DCs较其他方法能更好的促进T细胞浸润。DEX (CRCL-GL261)-DCs 能够促进产生抗肿瘤细胞因子，包括IL-2，IFN-γ，而且清除CD4+及CD8+T细胞，明显削弱了DEX (CRCL-GL261)-DCs的抗肿瘤作用。我们发现DEX (CRCL-GL261)-DCs能够通过通过下调(Cbl)-b 及c-Cbl信号通路，导致T细胞中 PI3K/Akt及ERK 活化。我们证明DEX (CRCL-GL261)-DCs产生更有效的抗肿瘤T细胞免疫反应，而且发现DEX (CRCL-GL261)-DCs通过调节Cbl-b 及 c-Cbl信号传导发挥抗肿瘤作用。.本项目的完成改良了DEX的制备方法，首次阐明DEX在胶质瘤免疫治疗中的作用，揭示其免疫调节机制，为胶质瘤免疫治疗提供高效可行的方法。