植入羊膜上皮细胞的化学去细胞肌肉复合组织工程支架治疗大鼠脊髓损伤的研究

轴突再生障碍和髓鞘再生不良限制了脊髓损伤的功能恢复。我们首次发现化学去细胞肌肉组织工程支架（CEAMS）可有效促进大鼠损伤脊髓的轴突再生，而且其排列规则并具有方向性，但由于新生有髓神经纤维少，限制了损伤脊髓的功能恢复。另外，我们发现羊膜上皮细胞植入损伤脊髓后可广泛迁移。因此，本研究拟利用羊膜上皮细胞分泌的BDNF，NT-3可促进损伤脊髓的髓鞘再生，且羊膜上皮细胞移植可促进损伤脊髓功能恢复的特点，采用羊膜上皮细胞结合CEAMS共同治疗脊髓损伤。同时，为了减轻损伤炎症对移植细胞存活的干扰，拟采用去甲二氢愈创木酸(NDGA)抑制巨噬细胞的活性来延长移植羊膜细胞的生存时间。综上，本研究拟确定NDGA对移植羊膜细胞生存时间的延长作用和最佳作用浓度，明确羊膜细胞移植对CEAMS有髓神经纤维的促进作用，观察羊膜上皮细胞与化学去细胞肌肉组织工程支架联合应用对大鼠脊髓损伤的治疗效果，并探讨其可能机制。

轴突再生障碍和髓鞘再生不良限制了脊髓损伤的功能恢复。我们以往的研究发现化学去细胞肌肉组织工程支架（CEAMS）可有效促进大鼠损伤脊髓的轴突再生，且其排列规则具有方向性，但由于髓鞘再生不良，限制了损伤脊髓的功能恢复。羊膜上皮细胞由于具有多种生物学特点逐渐受到再生医学领域的关注。本研究利用羊膜上皮细胞分泌的BDNF，NT-3可促进损伤脊髓的髓鞘再生，且羊膜上皮细胞移植可促进损伤脊髓的功能恢复的特点，采用羊膜上皮细胞结合CEAMS共同治疗脊髓损伤。同时，为了减轻损伤后炎症反应对移植细胞存活的干扰，采用去甲二氢愈创木酸(NDGA)抑制巨噬细胞的活性来延长移植羊膜细胞的生存时间。结果显示，大鼠羊膜上皮细胞植入去细胞肌肉支架中后，其增殖活性未受影响，仍表达BDNF和NT-3,提示大鼠羊膜上皮细胞与化学去细胞肌肉组织工程支架有较好的生物相容性。NDGA对脊髓损伤后的炎症反应有明显的抑制作用，并能够抑制反应性星形胶质细胞的增生，提示NDGA有利于改善损伤脊髓的微环境。NDGA能够明显增加移植大鼠体内羊膜上皮细胞的存活数量,对解决脊髓损伤后移植细胞的存活问题具有重要意义。去细胞肌肉组织工程支架的移植可促进断端脊髓受损神经穿越支架长入对侧脊髓，对脊髓损伤的组织工程治疗具有重要价值。羊膜上皮细胞与去细胞肌肉组织工程支架联合移植比单独支架移植更好地促进了5-HT阳性神经纤维和神经纤维髓鞘的再生以及大鼠的运动功能和神经传导功能的恢复。但NDGA的应用以及羊膜上皮细胞数量的增加对神经纤维的再生和大鼠功能恢复没有明显的促进作用，提示单纯改善外源性因素对促进轴突再生的效果有限。本研究揭示了NDGA、羊膜上皮细胞与化学去细胞肌肉组织工程支架联合治疗脊髓损伤的作用和机制，为脊髓损伤的治疗研究提供了新的方法和实验依据。