肝窦内皮细胞的调节机制与肝主疏泄的相关性研究

通过体内动物实验和体外细胞培养，并结合临床观察，运用电镜技术动态记录LSEC的变化，同时检测血清中炎症因子TNF-α，血管活性物质ET-1、NO，神经内分泌激素5-HT 、PGE2，肝脏组织中Cav-1、ICAM-1以及细胞中α-SMA等指标，对比分析两者的关系。求证"肝窦内皮细胞为肝主疏泄功能的物质基础，是神经内分泌系统与肝实体协同完成疏泄功能的连接点与调节枢纽"观点的科学性，并采用"证-脏腑本质改变-方-效"的研究模式，给予疏肝解郁药物逍遥散进行干预，观察其对LSEC的调节作用，反证假说的成立。阐述肝窦内皮细胞调节机制与肝主疏泄的关系，开创肝病证研究的新领域。

通过该课题的研究，我们完成了肝郁证动物实验研究和临床实验研究，取得了一定的成果。首先，理论研究方面我们发现：第一，肝窦内皮功能障碍是肝失疏泄的重要病机。肝窦内皮细胞窗孔构成的肝筛结构可能是肝疏布宣泄气机及精微毒物的超微结构，我们提出肝窦内皮功能障碍可能是肝失疏泄的病机关键，是肝主疏泄理论的新的发挥。第二：肝窦内皮窗孔异常与肝脾不调密切相关。脾主健运与肝主疏泄在生理上相辅相成，协同运化精微，这与现代解剖学的肝脏功能密切相关。因此，我们认为肝脏脂质代谢紊乱是肝脾不调致动脉粥样硬化（AS）的重要原因，与肝窦内皮窗孔的结构和功能异常相关。这将深化肝主疏泄的内涵研究。第三，提出“方剂组学”的研究模式，是将中医方剂转化为临床药物的转化医学策略。.其次，实验研究的动物方面：第一，我们采用慢性束缚应激加强制游泳的复合因素复制肝郁大鼠模型，并用逍遥散干预，观察逍遥散对肝郁证行为学评价的影响。结果表明逍遥散可以显著改善模型动物的行为活动减少及兴趣降低。第二，通过电镜观察逍遥散对肝郁证模型大鼠肝窦内皮窗孔的影响，结果显示模型组的肝窦内皮细胞窗孔普遍变小、变少甚至消失，窗孔排列紊乱，结构不清楚，局部出现肝窦毛细血管化的改变，而逍遥散对大鼠肝脏的损害作用有一定的改善作用。第三，逍遥散对体外培养的LSEC进行干预，结果显示模型组的Cav-1和α-SMA表达升高，NO、 ET-1含量增高，而逍遥散可显著降低此趋势。.最后，实验研究的临床方面：第一，对肝郁证患者进行治疗前后血清中NO、 ET-1、TNF-α、PGE2和5-HT含量的检测，结果显示逍遥散可降低肝郁证引起的NO、 ET-1、TNF-α、PGE2含量升高，升高肝郁证引起的5-HT含量降低。第二，肝组织病理活检显示逍遥散可以改善肝郁证造成的肝窦损害。对体外培养人源肝细胞中Cav-1表达的检测表明，逍遥散含药血清对其表达无明显影响。第三，对肝郁证（抑郁症）病人逍遥散治疗三周前后，抽取静脉血白细胞分离后，提取RNA并应用荧光定量PCR进行了TrkB，mTOR和BDNF表达的检测，结果发现逍遥散显著升高BDNF的表达。.该研究论证了肝窦内皮功能障碍是肝失疏泄的重要病机，并用逍遥散进行反证，同时验证了逍遥散对肝失疏泄的改善作用。