TGF-β1诱导的FGFR4表达对肝癌细胞侵袭和转移的影响

侵袭和转移是临床上绝大多数肝癌患者的致死原因。转化生长因子β信号通路(TGF-β)可促进肿瘤的侵袭和转移。成纤维细胞生长因子受体4( Fibroblast growth factor receptor 4, FGFR4)在许多恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、肺癌等的高表达与侵袭和转移有关。我们前期研究发现，TGF-β1可诱导肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达上调。那么，在肝癌中，TGF-β是否通过调控FGFR4表达上调，进而促进肿瘤的侵袭和转移？FGFR4的表达是否是这个传递通路中的关键因素？本项目拟构建针对FGFR4的短发夹RNA的真核表达载体，并将其转染入高表达FGFR4的肝癌细胞株中，获得稳定抑制FGFR4表达的细胞模型，再应用MTT, Boyden小室测定，裸鼠腹腔移植等方法，观察稳定抑制FGFR4表达对TGF-β促进肝癌细胞侵袭转移的影响，探讨以FGFR4为靶点治疗肝癌的可能性。

本项目实验部分已经全部完成。取得成果如下：.目的：研究TGF-β1诱导的FGFR4表达对肝癌侵袭和转移的影响。.内容：1. 稳定抑制FGFR4表达对TGF-β 促肝癌细胞侵袭转移的影响。包括四部分内容：高表达FGFR4肝癌细胞系的筛选；真核表达载体FGFR4-siRNA的构建和鉴定；沉默效果最佳的shRNA 质粒表达载体的筛选；经TGF-β处理后肝癌细胞侵袭力的观察。2. TGF-β诱导FGFR4促肝癌细胞侵袭和转移的分子机制研究。3.TGF-β1 和 FGFR4在肝癌患者中的表达相关性及对预后的影响。.结果：1.六种肝癌细胞株中HepG2表达FGFR4的水平最高；成功建立三种FGFR4基因靶向的miRNAs和阴性对照空载体质粒组，通过RT-PCR和Western blot筛选出P1为沉默效果最佳的细胞株。2.CCK-8法测试结果显示：TGF-β1能够抑制癌细胞增殖，并随着外源TGF-β1刺激浓度的增大，抑制效应增强。转染FGFR4-miRNA稳定抑制FGFR4可减弱该抑制效应；Transcell小室测定结果显示：TGF-β1可以促进肝癌细胞侵袭和迁移，转染FGFR4-siRNA稳定抑制FGFR4能抑制了细胞侵袭和迁移。3. TGF-β1 在肝癌组织中的阳性表达率为84.1% (106/126)，在癌旁组织中的阳性表达率为64.3% (81/126)； FGFR4在癌组织中的阳性表达率为74.6% (94/126)，在癌旁组织中的阳性表达率为57.1% (72/126)。TGF-β1 和 FGFR4在肝癌组织的表达程度均比癌旁组织增强，两者差异均有统计学意义( P < 0. 05)。肿瘤内TGF-β1 和 FGFR4的表达与TNM分级有关( P < 0. 05)，但与年龄、性别、肿瘤大小、血浆内AFP水平，肿瘤分化程度，淋巴结转移等病理指标没有显著的关系(p > 0.05)。实验还发现，TGF-β1的表达与FGFR4的表达之间存在正比的关系(r = 0.595, p < 0.05)，并且TGF-β1 和 FGFR4高表达的患者其总生存期较短(p < 0.05) 。4. TGF-β1调控FGFR4的表达可能是通过非依赖Smad4的丝裂原活化蛋白激酶途径（MAPK)。.结论：TGF-β1通过诱导FGFR4的表达促进肝癌侵袭和转移。