携带小核酸靶向性外泌体应用于阻断鼻咽癌血供的研究

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a kind of head and neck malignant tumor which present high incidence in China. To date the molecular mechanism of angiogenesis and vasculogenic mimicry is not fully elucidated in NPC. More specially, it has seldomly been reported that Epstein-barr virus encoded miRNA can regulate angiogenesis and vasculogenic mimicry of NPC. Our preliminary data demonstrated that EBV-miR-BART1-5p might significantly promote the foundation of NPC angiogenesis and vasculogenic mimicry. Hence, in this project, we are planning to clarify that EBV-miR-BART1-5p can promote tumor angiogenesis and vasculogenic mimicry of NPC. Moreover, taking advantage of our preliminarily established biological targeting technology, we then explore the underlying molecular mechanism. Furthermore, we are going to synthetize EBV-miR-BART1-5p-antagomiRs and Lamp2b-iRGD and obtain a mass of therapeutic targeting exosome system (iRGD-exos-antagomiRs) following transfect into 293T or DC cells. Finally, we intend to observe inhibited effect utilizing angiogenic and vascilogenic mimicry experiments in vivo and in vitro of NPC. This project is expected to find novel mechanism underlying EB virus to promote angiogenesis and vasculogenic mimicry of NPC, and provide new approaches for inhibiting study of NPC malignant progression.

鼻咽癌是我国高发的头颈部恶性肿瘤，迄今鼻咽癌新生血管和血管生成拟态的分子调控机制并未完全阐明，尤其是EB病毒编码miRNA相关的调控机制和靶向抑制鲜有报道。近来，我们发现EBV-miR-BART1-5p能够明显促进鼻咽癌新生血管生成和血管拟态形成。据此，本项目拟首先证明EBV-miR-BART1-5p能够促进鼻咽癌新生血管生成和血管拟态形成，探索其分子调控机制；继而，构建基于EBV-miR-BART1-5p-antagomiR和融合蛋白质粒Lamp2b-iRGD的具备肿瘤特异性的靶向性外泌体（iRGD-exos-antagomiRs），细胞和动物水平观察和评价其靶向阻断鼻咽癌血供（新生血管和血管拟态）的效果，评估其生物安全性和免疫原性。本项目有望丰富EB病毒编码miRNA促鼻咽癌新生血管生成和血管拟态形成的分子机制，为延缓鼻咽癌发生发展的研究提供新的参考思路。

近年来，越来越多的研究发现miRNAs在肿瘤新生血管和血管生成拟态中发挥不可或缺的作用。EBV编码的miRNA在鼻咽癌中的表达被证实与鼻咽癌的恶性进展相关。我们的前期研究结果揭示了EBV编码的miRNA（EBV-miR-BART1、BART10）具有明显促进鼻咽癌新生血管生成的潜能。基于鼻咽癌的发病特点及临床治疗过程中面临的抗血管生成治疗的瓶颈，亟需有针对性的研发基于非编码的例如miRNA的阻断血供（新生血管和血管生成拟态）的联合治疗策略和新型的抗肿瘤靶向药物。.由于核酸药物目前在抗肿瘤血管生成中具有一定的研究效果，我们从联合抑制肿瘤新生血管和血管生成拟态这方面入手进行靶向药物递送的研究；另外，由于人的miRNA在人体中表达的特点并不特异，而鼻咽癌的发生恰恰与EBV的感染密切相关；因此，我们在课题开展过程中予以适度更改，选择鼻咽癌中EBV编码的miRNA（EBV-miR-BART10-5p）进行联合抑制，以期望达到更佳的治疗效果。.重要的是，我们发现EBV-miR-BART10-5p过表达后的鼻咽癌细胞可以分泌更多的VEGF，预示着其具有更显著的促进肿瘤血管形成的潜能。在该项目的资助下，我们研究发现了EBV-miR-BART10-5p促进NPC的血管生成，并与宿主致癌miR-17-92 cluster的另一个重要成员hsa-miR-18a协同作用，以下调其共同靶标Spry3的表达。我们进一步表明，antagomiR-18a和antagomiR-EBV-BART10-5p与iRGD标记的HUVEC细胞衍生功能性外泌体一起抑制了NPC小鼠模型中的血管生成。我们的研究结果首先强调了EBV-BART10-5p和hsa-miR-18a在NPC血管生成中的作用，并为NPC治疗和其他EBV相关肿瘤的临床干预策略提供了新的见解。