基于ENS-ICC-SMC网络探讨腹部推拿调控肠动力的作用机制

Based on the two National Natural Science Foundation projects ,the purpose of this project is going in explore abdominal-Tuina regulating intestinal motility mechanism from the perspective of enteric nervous system- interstitial cell of cajal- smooth muscle cell (ENS-ICC-SMC). Establish gastrointestinal motility disorder animal models, that radionuclide imaging, gastrointestinal myoelectric indicators as effects. To observe the colonic ICC and cholinergic neurons and NO neurons to repair the network connection as well as the changes in ICC number and phenotype transformation by used the immunofluorescence technique before and after Tuina. Using electron microscope to observe the microscopic structure of ICC cells and cell gap between connections to clear the integrity of the ENS-ICC-SMC network. To gauge the changes in Ca2+ concentration in smooth muscle cells through the fluorescence probe Fura-2/AM, and then using RT-PCR technology to observe the effect of Ca2+ channels in smooth muscle cells mRNA expression .From the perspective of Individual-Cell-Molecular level to explain Abdominal Tuina signal inward through the physical transmission to regulating ion channel and influence on cell proliferation and differentiation, expression, which to adjust the ENS-ICC-SMC network and then to regulate the mechanism and improve the intestinal motility. After arrange and analyse indexes, this project has the important practical significance for abdominal-Tuina in the treatment of functional gastrointestinal disease theory and clinical practice and provide the scientific basis for the system of abdominal-Tuina mechanism in this study.

基于前期两项国家自然基金研究，本项目作为延续与扩展，旨在从肠神经系统-Cajal间质细胞-胃肠平滑肌细胞（ENS-ICC-SMC）网络角度，探讨腹部推拿调控肠动力的作用机制。以核素成像、肠电作为效应指标，建立肠动力障碍动物模型。运用免疫荧光双标技术，观察结肠组织中ICC与胆碱能、NO神经元网络结构和ICC数量变化及其表型转化。采用电镜观察ICC超微结构及细胞间的缝隙连接。以荧光探针Fura-2/AM钙成像技术检测平滑肌细胞内钙离子浓度的变化，并采用RT-PCR技术观察平滑肌细胞中L型钙离子通道的mRNA表达。整合、分析各项指标，从细胞、分子、基因水平，揭示腹部推拿通过物理信号向内传输，调控离子通道，影响细胞的增殖、分化和表达，从而调节ENS-ICC-SMC网络，进而改善肠动力的作用机制。该项目深化了腹部推拿基础研究，对促进推拿学科发展具有重要意义，为腹部推拿的临床推广提供了科学依据。

基于前期两项国家自然基金研究，本项目作为延续与扩展，旨在从肠神经系统-Cajal间质细胞-胃肠平滑肌细胞（ENS-ICC-SMC）网络角度，探讨腹部推拿调节肠动力的作用机制。通过检测实验兔结肠肌电、结肠传输功能，揭示肠动力障碍兔结肠动力特点，为临床诊治的完善提供理论依据；综合应用免疫学、遗传学、病理学等现代多学科的研究技术，通过对肠动力障碍兔结肠组织中Cajal间质细胞和ENS-ICC-SMC网络超微结构观察；氮能神经元在结肠组织的分布以及结肠平滑肌细胞中离子浓度（Ca2+含量）；L型钙通道mRNA表达等内容的分析，揭示腹部推拿方法防治肠动力障碍性胃肠病的作用机制，为手法治疗肠动力障碍疾病提供理论支持。采用冰敷束缚造模法，成功复制并优化肠动力障碍兔模型。通过生物材料体内荧光标记代替核素影像技术评价结肠传输功能及结肠肌电检测证实腹部推拿可显著改善肠动力障碍兔结肠收缩次数以及结肠运动节律，说明腹部推拿对肠动力的直接影响。通过腹部推拿对肠动力障碍兔Cajal间质细胞数量形态和超微结构影响的检测观察，以及腹部推拿提高肠动力障碍兔消化道自主神经末梢标志物C-Kit和nNOS表达，证实腹部推拿对ENS-ICC-SMC结构完整性的影响。通过腹部推拿有效降低肠动力障碍兔胃肠平滑肌细胞Ca2+浓度及L型Ca2+通道mRNA表达水平，证实腹部推拿对平滑肌Ca2+通道的调控，进而调节肠平滑肌收缩改善胃肠动力。本课题也证实腹部推拿可干预消化道动力产生与调节的基本功能单位，其机械力信号能转变成生物信号影响细胞的生化和生理应答，进而影响Cajal间质细胞、肠神经元或平滑肌细胞的形态变化、增殖、分化，进而改善ENS-ICC-SMC网络。该项目深化了腹部推拿基础研究，对促进推拿学科发展具有重要意义，为腹部推拿的临床推广提供了科学依据。