基于Tryptase-PAR2-PKCε通路敏化TRPV1探讨腹部推拿干预IBS内脏痛的作用机制

Visceral hypersensitivity is one of the important pathogenesis of irritable bowel syndrome (IBS). Sensitization of TRPV1 is a key site to mediate the development of visceral hypersensitivity, and the activation of mast cells (MC) is the starting point of visceral hypersensitivity. Its regulatory mechanism is closely related to the Tryptase-PAR2-PKCε pathway. Preclinical studies have confirmed the efficacy of abdominal Tuina in the treatment of IBS visceral pain. Basic research shows that abdominal Tuina can effectively interfere with the central sensitization of IBS, but the mechanism of local peripheral sensitization of the intestine lacks in-depth exploration. This project is an extension of the previous natural issues in the country, using IBS as a breakthrough in visceral pain, sensitizing TRPV1 based on the Tryptase-PAR2-PKCε pathway, and exploring the IBS mechanism of abdominal Tuina with multiple levels of detection and multiple levels of detection, in order to confirm that “abdominal Tuina The mechanical force signal is transmitted inward, acts on the intestinal MC, regulates MC degranulation, controls Tryptase release, and utilizes the Tryptase-PAR2-PKCε pathway to regulate the TRPV1 sensitization, thereby improving the authenticity of the intestinal hypersensitivity hypothesis, further revealing Abdominal Tuina intervention IBS mechanism of action, to provide a scientific basis for the construction of abdominal Tuina treatment of digestive diseases.

内脏高敏感性是肠易激综合征（IBS）重要发病机制之一，TRPV1敏化是介导内脏高敏感发生的关键位点，肥大细胞（MC）活化是内脏高敏感发生的始动环节，其调控机制与Tryptase-PAR2-PKCε通路密切相关。前期临床研究证实腹部推拿治疗IBS内脏痛疗效肯定，基础研究表明腹部推拿可以有效干预IBS中枢敏化，但对肠道局部外周敏化的机制缺乏深入探究。本项目是既往国自然课题延伸，以IBS内脏痛为突破口，基于Tryptase-PAR2-PKCε通路敏化TRPV1，从靶点多环节、检测多水平上探讨腹部推拿治疗IBS机制，以期证实“腹部推拿通过机械力信号向内传输，作用肠道MC，调控MC脱颗粒，控制Tryptase释放，并借助Tryptase-PAR2-PKCε通路，调控TRPV1敏化，进而改善肠道高敏感性”假说的真实性，进一步揭示腹部推拿干预IBS的作用机制，为构建腹部推拿治疗消化系统疾病提供科学依据。

腹泻型肠易激综合征（IBS-D）发病复杂，其机制至今尚未完全明确。随着现代研究的深入，内脏高敏感被认为是其重要病理生理发生机制之一。近年来，肥大细胞（MC）在IBS-D发病机制中的作用逐渐受到研究者们的关注。MC在IBS-D发病中作用重要，而引人关注的是MC在IBS-D内脏敏感性方面的作用，MC活化也被认为是内脏高敏感发生的始动环节，是生理学和病理学疼痛途径的重要调节剂。研究显示当多种机械、化学刺激或神经递质作用于神经末梢，引起外周神经损伤后会产生炎性反应，激发免疫细胞如MCs活化脱颗粒，分泌释放类胰蛋白酶（Tryptase）、白细胞介素5、5-羟色胺、组胺以及神经生长因子，进而引起蛋白酶激活受体2（PAR2）的过度表达，且进一步激活蛋白激酶Cε（PKCε），PKCε活化可介导辣椒素受体1（TRPV1）磷酸化，最终导致内脏高敏感的发生。在此，我们采取母婴分离联合束缚应激、强迫游泳、夹尾刺激法复制IBS-D大鼠模型，以Bristol大便性状评分和腹壁撤退评分验证模型，并采用旷场试验进行行为学检测，运用HE染色观察结肠黏膜形态，光镜下观察大鼠结肠组织MC形态学及数量变化，采用透射电镜观察大鼠结肠黏膜超微结构特征。采用RT-PCR技术检测大鼠结肠组织TRPV1mRNA的表达水平，免疫荧光法检测、膜片钳等技术了解结肠特异DRG神经元阈电流值和动作电位频率变化，Western-blot法检测大鼠结肠组织中PAR2和PKCε蛋白表达，以及Tryptase-PAR2-PKCε通路中关键蛋白PLC和PIP2表达。结果显示，腹部推拿有效调控了MC脱颗粒，降低了肠道炎症反应，延缓调控了Tryptase释放，验证了Tryptase-PAR2-PKCε通路在其中的重要作用，最终有效调控TRPV1敏化，进而改善了IBS-D大鼠肠道高敏感性作用机制。我们的研究亦解释了俗语“腹痛揉腹来止痛”。