基于BDNF-CREB-Bcl-2蛋白通路探讨腹部推拿调控慢性应激所致CFS及海马神经重塑的作用机制

Chronic stress is the main cause of chronic fatigue syndrome（CFS）,the balance of Hippocampal neuron apoptosis and regeneration as the material basis of chronic stress cause, is the key of CFS.The purpose of this study is to affirm the clinical curative effect of Abdominal-Tuina,with CFS rats as model,from the BDNF-CREB-Bcl-2 protein pathway,to investigate the mechanisms of Abdominal-Tuina therapy in treating CFS.Using multiple stress method copy the CFS model,with the exhaustive swimming,open field test and other methods of behavior assessment as an effect index,Validation of the model is successful.Using RT-PCR Technology test the hippocampus BDNF, CREB, Bcl-2 protein mRNA Expression.Application of Western-Blot and Fura2/AM calcium imaging techniques to observe the change of the key transmitter and messenger protein.HE staining was done to observe the change of quantity and structure in hippocampal neurons .After arrange and analyse indexes,to reveal the abdominal massage regulating BDNF-CREB-Bcl-2 protein pathway, hippocampal neuronal remodeling , the mechanism of treatment of CFS.This project has the important practical significance for the basic research of abdominal-Tuina and clinical practice and provide the scientific basis for the system of abdominal-Tuina mechanism in this study.

慢性应激是慢性疲劳综合征（CFS）发病的主要原因，海马神经元凋亡与再生平衡失调作为慢性应激致病的物质基础，是CFS发生的关键。本研究旨在肯定腹部推拿临床疗效基础上，以CFS大鼠为模型，从BDNF-CREB-Bcl-2蛋白通路途径，探讨腹部推拿干预CFS的作用机制。拟采用复合应激方法复制CFS模型，并以力竭游泳、旷场实验等行为学评价作为效应指标，验证模型成功与否。采用RT-PCR 技术测定海马区BDNF、CREB、Bcl-2蛋白mRNA表达。应用Western-Blot及Fura2/AM钙成像技术观察上述通路关键递质及信使蛋白变化。运用HE染色技术观察海马神经元数量和结构改变。整合分析上述指标，从多水平，揭示腹部推拿调控BDNF-CREB-Bcl-2蛋白通路，干预海马神经元重塑，治疗CFS的机制。该项目将进一步深化腹部推拿基础研究，对促进推拿学科发展具有重要意义，为腹部推拿推广提供依据。

慢性应激是慢性疲劳综合征(CFS)发病的主要原因，海马神经元凋亡与再生平衡失调作为慢性应激致病的物质基础，是CFS发生的关键。本研究旨在肯定腹部推拿临床疗效基础上，以CFS大鼠为模型，从BDNF-CREB-Bcl-2蛋白通路途径，探讨腹部推拿干预CFS的作用机制。研究结果显示，造模结束时模型大鼠与正常大鼠比较，力竭游泳缩短、停止挣扎时间延长、垂直活动得分减少、水平活动得分减少(P<0.05)，干预结束时，干预组大鼠与模型组大鼠比较，力竭游泳延长、停止挣扎时间缩短、垂直活动得分增加、水平活动得分增加(P<0.01)。说明腹部推拿可有效改善 CFS 大鼠的疲劳抑郁状态。海马组织 HE 染色结果显示：空白组大鼠海马神经细胞的排列非常紧密，多数细胞核深染，核仁明显可见；CFS 模型组大鼠海马神经细胞排列很散乱，一些细胞结构消失，核浓缩，核仁不甚明显；腹部推拿干预组大鼠的海马神经细胞排列较紧密，细胞结构很清晰，核仁明显可见。大鼠海马区 BDNF、CREB、Bcl-2 m RNA表达的检测结果显示：相对于空白组，模型组BDNF、CREB、Bcl-2 的 mRNA表达水平降低，腹部推拿干预后上述通路mRNA表达水平升高，其中CREBmRNA表达较模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，但总体仍低于空白组。大鼠海马区ca2+以及MAPK、ERK的蛋白表达结果显示，干预两周后，与正常对照组比较，腹部推拿组、模型对照组大鼠上述指标升高，且差异显著（P＜0.05）。而腹部推拿组大鼠经过腹部推拿干预后较模型对照组大鼠表达量降低。上述实验结果，验证了腹部推拿提高大脑局部神经元的功能和结构的可塑性，使之更能适应环境应激因素的刺激，进一步说明腹部推拿可能是通过干预BDNF-CREB-Bcl-2 蛋白通路表达，纠正海马神经细胞凋亡与再生平衡失调，达到治疗CFS 的作用。项目将进一步深化腹部推拿基础研究，对促进推拿学科发展具有重要意义，为腹部推拿推广提供依据 。