补益营卫方对衰老表皮稳态影响的机制研究

Anti aging skin is an important research field of aging medicine. There is a direct relationship between physiological and pathological of the skin about Ying-Wei. Ying-Wei deficiency is leading to important material base of skin aging. Through replenishing Ying-Wei delay skin aging research rarely seen others reported. Applicants found the recipe of supplementing Ying-wei has anti-lipid peroxidation and improve aging skin morphology in early experimental study. The later study found that the prescription can promote aging skin fibroblast proliferation, regulation of TGF-β1/Smads signal transduction pathways, thereby promoting aging dermis steady state. This study intends to natural aging animal model, using cell culture, immunohistochemistry, immunofluorescence, Western blot and RT-PCR research methods, continue to observe the effects of replenishing Ying-Wei in the aging skin epidermal homeostasis ( stratum corneum barrier homeostasis, lipid barrier and immune barrier ), further reveal the internal mechanism of delaying skin aging with the recipe of supplementing Ying-wei.

抗皮肤衰老是衰老医学研究的重要领域。营卫与皮肤的生理和病理有直接关系。营卫不足是导致皮肤衰老的重要物质基础。通过补益营卫延缓皮肤衰老的研究鲜见他人报道。申请者在前期实验研究中发现补益营卫方药具有抗脂质过氧化和改善衰老皮肤形态学等作用。其后的研究发现本方可促进衰老皮肤成纤维细胞增殖，调节TGF-β1/Smads信号转导途径，从而促进衰老皮肤真皮稳态。本研究拟通过自然衰老动物模型，利用细胞培养、免疫组化、免疫荧光化学、western blot和RT-PCR等研究方法，继续观察补益营卫对衰老皮肤表皮稳态（角质层物理屏障、脂质屏障和免疫屏障）的影响，进一步揭示补益营卫方延缓皮肤衰老内在机制。

本研究利用自然衰老动物模型和衰老表皮细胞模型，研究了补益营卫方对衰老表皮角质形成细胞的增殖能力、表皮脂质代谢等的影响，探讨补益营卫在维持表皮稳态方面的作用。结果显示，（1）衰老时表皮形成细胞增殖能力下降，端粒酶活性下降，凋亡指数增加，角质形成蛋白（K）代谢紊乱，其中K1、K2、K4、K9、K13、K14、K16、K17和K18在mRNA和蛋白水平表达均升高；K5、K15和K20在mRNA水平表达增加，而在蛋白水平表达不变；K3和LXR在mRNA水平表达增加；K19在mRNA水平表达增加，在蛋白表达水平下降；整合素β1蛋白表达水平下降。经过补益营卫方干预后，衰老表皮增殖能力得到明显改善，端粒酶活性增强，降低了凋亡指数，K1、K2、K4、K9、K13、K14、K16、K17和K18在mRNA和蛋白水平表达均降低；K3、K5、K15、LXR和K20在mRNA水平表达降低；K19在mRNA水平表达下降，在蛋白表达水平增加；整合素β1蛋白表达水平增加。（2）衰老时，角质形成细胞脂质代谢异常，HMGCR、LASS4、APOE、APOD、SREBP2、FASN、SCD、SMPD2和SREBP1mRNA表达水平均升高，经补益营卫方干预后，其mRNA表达水平均下降。.综上所述，可以看出，①补益营卫方具有调节衰老表皮角质形成细胞增殖能力，维持表皮增殖稳态的作用；②补益营卫方具有调节衰老表皮脂质代谢，恢复表皮脂质代谢稳态的作用。③从对衰老表皮角质形成细胞整合素β1的影响，推测补益营卫方维持表皮增殖稳态可能涉及表皮干细胞。