补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞影响的机制研究

Delaying skin aging is an important area in aging medicine research. Ying-Wei which is "filling the skin, Strengthening the skin striae" is directly related to physiology and pathology of skin. Ying-Wei deficiency is an important material basis for skin aging. It has not been reported to delay skin aging by supplementing . Early experiment of he applicant found that supplementing Ying-Wei can inhibit apoptosis of the aging skin epidermal cells, decrease apoptosis index, promote the expression of telomerase in aging skin, promote the expression of integrin and keratin K19 in the epidermis of aging skin, inhibit epidermal keratin K16 expression.The mechanism involved the protection of epidermal homeostasis, which is associated with epidermal stem cells.In this study, by using of research methods like Immunohistochemistry, Immunocytochemistry ,Immunofluorescence ,western blot and RT-PCR on the the natural aging animal model , to observe the effect of supplementing Ying-Wei Fang stem cell proliferation and related Wnt/β-catenin and Notch signaling pathways of aging skin ,to further reveal the intrinsic mechanism of supplementing Ying-Wei Decoction delaying skin aging .

延缓皮肤衰老是衰老医学研究的重要领域。营卫“充皮肤、肥腠理”与皮肤的生理和病理直接相关。营卫不足是导致皮肤衰老的重要物质基础。通过补益营卫延缓皮肤衰老的研究未见他人报道。申请者在前期实验研究中发现补益营卫方能够抑制衰老皮肤表皮细胞的凋亡；降低细胞凋亡指数；促进衰老皮肤端粒酶的表达，保护端粒；促进衰老皮肤表皮整合素、表皮角蛋白K19的表达，抑制表皮角蛋白K16的表达，其作用机制涉及保护表皮稳态，从而与表皮干细胞关联。本研究拟通过自然衰老动物模型，利用免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光化学、western blot和RT-PCR等研究方法，继续观察补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞增殖及相关Wnt/β-catenin和Notch信号途径的影响，进一步揭示补益营卫方延缓皮肤衰老内在机制。

本项目主要研究补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞影响的相关机制。通过观察补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞增殖及相关Wnt/β-catenin和Notch信号途径的影响，揭示补益营卫方延缓皮肤衰老内在机制。研究发现衰老时，皮肤表皮干细胞增殖及分化标志物β1整合素、P63、CD133、ki67、兜甲蛋白、α6整合素、K14、K19、p63、Nestin和PCNA明显下降，经补益营卫方干预后，上述标志物明显改善。CD71和K10衰老时未见异常。.衰老时，与年轻组干细胞比较，老年组表皮干细胞Wnt1、β-catenin、LRP5、LRP6、Fzd4、C-myc、Axin2、mmp-7、Dash1、LEF1 mRNA和蛋白水平明显升高；DKK1阻断Wnt/β-catenin通路后，经2.5％药物干预，衰老表皮β-catenin、LRP5、C-myc、Axin2、LEF1 mRNA和蛋白水平较老年+DKK1组明显降低（P<0.05），提示Wnt/β-catenin通路经DKK1阻断后，补益营卫方对衰老小鼠表皮干细胞Wnt/β-catenin通路的β-catenin、LRP5、C-myc、Axin2、LEF1 mRNA和蛋白相对表达量具有明显的抑制作用。.衰老时，与年轻组干细胞相比，老年组Notch1、Jagged1、RBP-Jκ和Hes1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05；P<0.01）；DAPT阻断Notch通路后，经2.5％药物干预，衰老表皮Notch1、Jagged1、RBP-Jκ和Hes1mRNA及蛋白表达量较老年+DAPT组明显降低（P<0.05；P<0.01）揭示补益营卫方通过抑制衰老表皮干细胞Notch通路阻断后Notch1、Jagged1、RBP-Jκ和Hes1基因及蛋白的表达,从而起到延缓皮肤衰老的作用。.这些研究数据显示衰老时表皮干细胞增殖不足，Wnt/β-catenin和Notch通路兴奋可能是衰老表皮细胞更新缓慢，而表皮脱屑增加，粗糙变薄的内在机制。对揭示皮肤表皮衰老提供了实验基础。而通过补益营卫方干预后，其相关病理变化明显改善，这一发现为揭示中医营卫理论“肥腠理”作用增加了新的科学内涵。