鼠源性抗人肺癌单克隆抗体3C9V区cDNA克隆及序列测定

参照有关资料，我们设计合成抗肺癌单克隆抗体3c9轻重链可变区引物，用逆转隶PcR方法扩增编码3c9轻重可变区cDNA片段，电泳鉴定区分别酶切消化、克隆至puc18、puc19质粒中，电穿孔法转染大肠杆菌，氨苄青霉素及Xgal筛选酶切重组质粒鉴定；扩增纯化重组质粒DNA，双脱氧未端终止法测定轻重链可变区cDNA序列分别为359、339bp，同源性分析表明所获得cDNA正是设计所需要的。并确定其CDR基因。又将重链可变区基因克隆至2lgs-17质粒中，构建嵌合抗体基因。我们实验结果表明：所获抗体3c9可变区基因是新的基因。所设计引物特异性好重复性好。逆转录PCR简便快速分离可变区基因。双脱氧未端法测序，方法较可靠。完成预期目标。