GC-MSC和癌组织来源的MicroRNAs在胃癌诊治中的作用

我们首次分离获得一种重要的胃癌微环境细胞即胃癌间质干样细胞(GC-MSC)，同时获得癌旁组织间质干样细胞（GCN-MSC），采用miRNA芯片从GC-MSC/GCN-MSC、胃癌组织/癌旁组织、胃癌细胞共培养后骨髓MSC/骨髓MSC中筛选出12个三组异常表达一致的miRNAs，这些miRNAs是否可以作为胃癌非创伤性诊断标志物和治疗靶点值得研究。本课题旨在检测胃癌患者血浆、GC-MSC及胃癌组织中这些miRNAs水平，结合临床资料，从中分析确定有价值的miRNAs(GG-miRNAs)，检测胃癌和非胃癌患者血浆及其囊泡（exosome）中GG-miRNAs水平，分析比较GG-miRNAs诊断敏感性及特异性；采用基因修饰和基因沉默等技术分析GG-miRNAs在胃癌微环境细胞GC-MSC和胃癌细胞中的功能。本研究为胃癌诊断、疗效观察及预后判断提供非创伤性指标，为胃癌治疗提供新的分子靶点。

在首次分离获得一种重要的胃癌微环境细胞即胃癌间质干样细胞(GC-MSC)和相应的癌旁组织间质干样细胞（GCN-MSC）以及采用miRNA芯片从GC-MSC/GCN-MSC、胃癌组织/癌旁组织、胃癌细胞共培养后骨髓MSC/骨髓MSC中筛选获得三组异常表达一致miRNAs的工作基础之上，采用定量RT-PCR检测GC-MSC和胃癌组织中miRNAs的表达分布，结合临床病理信息分析，确定与临床病理进程密切相关的miRNAs为GG-miRNAs。收集并分离胃癌患者术前、术后及复发后血浆标本，同时建立裸鼠胃癌及治疗模型并收集不同阶段的血清标本，检测分析GG-miRNAs在胃癌诊断、疗效观察及预后判断中的价值。采用基因干扰技术改变GC-MSC中GG-miRNAs的表达，分离GC-MSC和GCN-MSC来源exosome并检测其GG-miRNAs的表达量，分析GG-miRNAs介导GC-MSC对胃癌细胞的调控作用及方式。采用基因沉默及修饰技术改变胃癌细胞中GG-miRNAs的表达并分析其在胃癌细胞中的生物学功能及其分子机制。本项目按照研究计划执行并完成整体工作，共发表论文9篇，组织省级学术会议1次，培养博士、硕士各2名。研究结果显示：(1) GC-MSC和胃癌组织共差异miRNAs谱包括33个表达上调和30个表达下调miRNAs。GC-MSC和胃癌组织中的检测及临床意义分析确定miR-221、miR-222、miR-214、miR-17-5p和miR-20a（miR-17-5p/20a）为GG-miRNAs；（2）miR-221、miR-222和miR-214的异常表达与胃癌细胞侵袭的深度、脉管转移和TNM分期相关，miR-17-5p/20a的表达与胃癌体积大小相关；（3）血浆miR-17-5p/20a表达水平与胃癌患者病理进程、预后密切相关；（4）GC-MSC来源exosome内富含有GG-miRNA并介导GC-MSC促进胃癌细胞增殖与迁移；（5）miR-17-5p/20a转录后水平抑制p21和TP53INP1的表达促进胃癌增殖，MDM2是其功能发挥的重要介导因子。本研究以胃癌微环境细胞和胃癌组织重叠miRNAs分子为出发点，明确GG-miRNAs有望成为胃癌诊断、疗效观察及预后判断有效的非创伤性生物标记物，也为胃癌治疗提供针对微环境细胞和肿瘤细胞新的分子靶点。