膀胱尿路上皮癌差异表达microRNAs克隆及其在致癌机制中作用的研究

microRNAs是一类内源性的类似siRNA的小RNA分子，由高等真核生物基因组编码，通过核酸序列的互补性结合到特定的靶mRNA上调节翻译或是降解mRNA来调控基因表达。本项目建立膀胱尿路上皮癌和膀胱正常尿路上皮miRNAs表达谱；分离、筛选、鉴定肿瘤发生相关特异性miRNAs；针对肿瘤发生相关特异性miRNAs，设计特异性的引物，利用荧光实时定量PCR进行验证；对确认的肿瘤发生相关特异性miRNAs，应用基因转染技术和RNA干扰技术对原代培养膀胱尿路上皮癌细胞进行双向调控其表达,观察其是否会对细胞增殖、细胞周期等产生影响，或是对于凋亡刺激的反应有所变化（对凋亡刺激敏感度是否发生变化）；利用蛋白芯片技术进一步证实明确miRNAs表达变化与膀胱癌发生的确切关系。探索发现miRNAs针对的膀胱尿路上皮癌靶基因和涉及的相关信号通路。为膀胱尿路上皮癌的早期诊断和靶细胞治疗基因提供新的生物学标记。