SV2A配体以单核细胞为靶点的抗动脉粥样硬化效应与机制研究

Studies confirmed that monocytes play a key role in vascular remodeling of atherosclerosis (AS), therefore monocytes have become popular therapeutic targets for anti-atherosclerotic intervention. Our previous studies found that synaptic vesicle 2A (SV2A) exist in both human and mouse monocytes. Furthermore, we also found that SV2A ligand inhibits the migration of CD14++CD16+ monocyte subpopulations in vitro and delays the process of atherosclerosis in New Zealand white rabbits. Therefore, Histochemistry, fluorescent latex microspheres injection and antibody stripping monocytes are to be used in ApoE-/ - mice with carotid atherosclerosis to further verify the anti-atherosclerotic effect of SV2A ligand and whether the function of monocytes is necessary. To clarify the underlying mechanisms, the effects of SV2A ligand on monocytes migration and the expression level of related receptors as well as the effects of SV2A mutation on these processes will be examined by in vitro assay, biochemistry and gene mutation. This study will provide theoretical evidence and new therapeutic method for anti-atherosclerotic treatment.

研究证实，单核细胞在动脉粥样硬化（AS）血管重构过程中发挥着关键作用，以单核细胞为靶点的抗AS干预是当前研究热点。本课题组前期研究发现，人和小鼠单核细胞内存在突触囊泡蛋白2A（SV2A），SV2A配体抑制CD14＋＋CD16＋亚型单核细胞的趋化运动，并显著减缓新西兰大白兔AS演变。据此，本项目拟在ApoE-/-小鼠模型中采用组织学观察、荧光乳胶微球体内注射及抗体剥离单核细胞等技术，进一步验证SV2A配体对AS演变的影响以及该影响与单核细胞的关系。然后，通过体外实验，生化实验和基因突变等检测SV2A配体对单核细胞趋化运动及相关受体的表达量的影响，以及SV2A突变对这些过程的影响，阐明SV2A配体以单核细胞为靶点影响AS血管重构的分子机制。本研究将为SV2A配体治疗AS的新途径提供理论依据。

单核细胞在动脉粥样硬化（AS）血管重构过程中发挥着关键作用，本课题组前期研究发现，人和小鼠单核细胞内存在突触囊泡蛋白2A（SV2A），SV2A配体-左乙拉西坦（LEV）抑制单核细胞的趋化运动，并显著减缓新西兰大白兔AS演变。目的：验证LEV的抗动脉粥样硬化效应和影响单核细胞趋化作用相关，并进一步探讨其机制。方法：首先，观察服用LEV的癫痫患者，其颈动脉粥样硬化的程度较服用其他抗癫痫药物患者相比是否减轻。其次，离体实验检测人单核细胞系-THP细胞上是否存在SV2A蛋白的表达，并进一步检测体外培养的THP单核细胞中加入LEV后对其趋化运动，即黏附率和迁移率的影响。第三，构建SV2A（383位点）突变质粒，此位点已报道是人SV2A的功能位点。将此突变质粒和野生型SV2A质粒转染正常THP单核细胞，建立SV2A突变的THP单核细胞模型和SV2A野生型THP单核细胞模型。第四，在上述构建的两种THP单核细胞模型中，加入LEV共培养，再次检测LEV对THP单核细胞体外趋化运动的影响。最后，通过Q-PCR和WB方法检测和单核细胞趋化运动密切相关的受体及其下游信号通路表达的变化，进一步阐明LEV对单核细胞趋化运动影响的分子机制。结果：服用LEV的癫痫患者其颈动脉粥样硬化的程度较服用其他抗癫痫药物的患者相比明显减轻。人的单核细胞系-THP细胞上存在SV2A蛋白的表达。体外培养的THP单核细胞中加入LEV后其黏附率和迁移率均明显降低，提示LEV的抗动脉粥样硬化效应可能和降低单核细胞的趋化作用相关。构建的SV2A突变的THP单核细胞模型和SV2A野生型THP单核细胞模型中加入LEV后发现，SV2A野生型THP单核细胞模型组和未加入LEV相比，黏附和迁移率均明显降低；而SV2A突变的THP单核细胞模型组和未加入LEV前相比，黏附率和迁移率均无明显改变。提示LEV对THP单核细胞趋化和黏附率的降低，可能是通过SV2A蛋白发挥作用的。LEV给药后CCR2受体及P-AKT的表达量明显降低，提示CCR2受体及P-AKT信号通路，可能是LEV抗动脉粥样硬化效应以及降低THP单核细胞趋化运动的分子机制之一。